從培養細胞中分離的細胞核制備成的提取物在體外轉錄和mRNA加工中具有精確的功能，（1）純化蛋白質（2）核提取物。
| 實驗方法原理 | 通過向某些蛋白質溶液中加入某些無機鹽溶液后，可以降低蛋白質的溶解度，使蛋白質凝聚而從溶液中析出,這種作用叫作鹽析，是物理變化，可復原。對于特定的蛋白質，影響蛋白質鹽析的主要因素：無機鹽的種類、濃度、溫度和PH值。 |
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| 實驗材料 | 哺乳動物 |
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| 試劑、試劑盒 | PBS低滲緩沖液低鹽緩沖液透析緩沖液 |
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| 儀器、耗材 | 轉子離心機電導計透析膜勻漿機離心管 |
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| 實驗步驟 | 1a. 收集轉瓶培養的細胞：將濃度為5~10x108細胞/l 的培養液用1 L 的塑料瓶1 850 g 離心20 min，將細胞收入50 ml 錐形離心管中（每管收2~3 L 培養液中的細胞）。進行步驟2。 1b. 收集單層培養的細胞：單層細胞長滿后去掉培養液。用PBS洗1次。將細胞刮入新鮮PBS液里，倒進錐形離心管中。進行步驟2。
2. 1 850 g 離心10 min。
3a. 轉瓶培養細胞：測量壓緊后細胞的體積。將細胞重懸于約5倍于其pcv的PBS液中，1 850 g 離心10 min。進行步驟4。
3b. 單層培養細胞：測量pcv，進行步驟4。
4. 快速地將沉淀的細胞重懸于5倍體積的低滲緩沖液中，1 850 g 離心10 min。將細胞沉淀重懸于3倍于原pcv的低滲緩沖液中，放置在冰上10 min，讓細胞腫脹。 5. 在Dounce氏玻璃勻漿器中用B號研杵緩饅上下抽提10次以上。用臺盼藍染色排斥法在顯微鏡下檢査細胞裂解滑況（應大于80%~90%）。
6. 3 300 g 離心15 min，保留上清用來制備S-100細胞質提取物。
7. 測量第6步離心沉淀的壓緊后的細胞核體積。用1/2 pnv體積的低鹽緩沖液重懸細胞核（必要時用Dounce氏玻璃勻漿器勻漿一次）。
8. 在輕輕攪拌的同時，逐滴加入1/2 pnv體積的高鹽緩沖液。終濃度應約為300 mmol/l。 9. 25 000 g 離心30 min，測量核提取物的電導率（用上請，見步驟10）。
10. 將核提取物加入透析管中，在50倍體積的透析液中進行透析，直到提取物的電導率和透析液一致為止（當提取物的KCl濃度達到100 mmol/l 時）。盡量縮短透析時間。 11. 將提取物從透析袋中移出45 000 g 離心20 min。 12. 用Bradford分析法測定上清中蛋白質的濃度。分裝，浸入液氮中速凍，- 80℃保存。 收起 |
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| 注意事項 | 所有步驟的操作均在0?4℃進行，在冷室內操作更好。緩沖液和設備要預冷。所有離心均在4℃進行，轉子要預冷。 |
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| 其他 | 細胞核提取方法的優化：
1. 按基本方案中歩驟1~7操作。 2. 將細胞核懸液分成5等份。在冷室內不斷攪拌，按如下方法在每份懸液中加入1/3體積髙鹽緩沖液，在第1份中加濃度最低（0.8 mol/l）的高鹽緩沖液，其余各份中依次加入KCl濃度逐漸增髙（直到1.6 mol/l）的高鹽緩沖液。輕輕混合30 min。 |
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