【實驗原理】
RNA分子中的核糖在濃酸中加熱，脫水轉變成糖醛，后者在氯化鐵存在下，與地衣酚試劑（3，5-二羥基甲苯）反應，縮合成綠色化合物，在670nm處有最大吸收峰，從而可進行定量測定。待測樣品中的RNA濃度在20～200μg/mL之間時，其吸光度與濃度成正比。反應式如下：
核 糖 糖 醛 綠色化合物
【實驗內容與方法】
1．取中試管3支，按表2-17操作
表2-17 RNA的測定方法
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試 劑（mL） |
標準管 |
標本管 |
空白管 |
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RNA標準液 |
1.0 |
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RNA提取液 |
1.0 |
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蒸餾水 |
1.0 |
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地衣酚試劑 |
3.0 |
3.0 |
3.0 |
2． 混勻各管 置于沸水浴中加熱10min，取出冷卻，以空白管調零點，在670nm波長處比色，讀取各管的吸光度。
3．計算
【實驗準備】
1． RNA標準液 準確稱取RNA用0.001mol/L NaOH配制成100mg/mL的溶液。
2．地衣酚試劑 稱取地衣酚（3，5-二羥基甲苯）100mg，溶于100mL濃鹽酸（AR）中，再加入100mg FeCl3.6H2O。應用前新鮮配制。
3．儀器：紫外可見分光光度計、試管、刻度吸管