胚收集和制備
1. 可用任一種方法收集果蠅胚（Oregon R P2 或任何其他的野生系）。
制備勻漿
2. 直接在 9 倍體積的抽提緩沖液（溶液 E ) 中融化凍存胚。
溶液 E：
250 mmol/L 蔗糖
50 mmol/L NaCl
50 mmol/L Tris-HCl ( pH 7.5)，( 25℃)
5 mmol/L MgCl2
1 mmol/L PMSF
1 mmol/L TPCK
2.5 mmol/L NEM
3. 胚完全融化后在帶緊密結合研杵（A ) 的 Dounce 勻漿器中推搗 4 次使之破碎，用 4 層溶液 E 浸透的 120 μm 尼龍網過濾勻漿。
細胞核組分粗品的純化
4. 過濾后，2000 g 離心勻漿 10 分鐘。
5. 吸出上清，沉淀部分（含細胞核）重懸浮于 0.5 倍體積的溶液 E 中。
6. 再加 4.5 倍體積的溶液 E 稀釋細胞核懸液，按上述方法（2000 g 10 分鐘）離心。
7. 重復一次步驟 5 和 6（重懸浮、稀釋、離心）。
細胞核的熱穩定/核酸酶消化處理
8. 將最后一次 2000 g 離心后的細胞核用帶寬松結合研杵（B ) 的 Dounce 勻漿器重懸浮于 0.5 倍體積的 20 mmol/L Tris-HCl (pH 7.5)，5 mmol/L MgCl2 溶液中。
9. 再加 0.5 倍體積的上述溶液，然后加入終濃度分別為 8 μg/ml 和 10 μg/ml 的 RNA 酶 A 和 DNA 酶Ⅰ。
10. 將重懸浮后加核酸酶的細胞核在 37℃ 孵育 5 分鐘。
用非離子活化劑和 NaCI 抽提熱穩定的、核酸酶處理過的細胞核
11. 2000 g 離心 10 分鐘回收熱穩定和核酸酶消化的細胞核。
12. 向沉淀中（含熱穩定的核酸酶處理的細胞核）加入 0.9 倍體積的溶液 F，用帶寬松結合研杵（B ) 的勻漿器重懸浮。
溶液 F：
292 mmol/L 蔗糖
10 mmol/L Tris-HCl (pH 7.5)
0.1 mmol/L MgCl2
13. 加 0.1 倍體積的 20% (w/v) Triton X-100 到細胞核懸液中，使 Tnton X-100 的終濃度為 2% (w/V)，冰上孵育 10 分鐘。
14. 將經過熱穩定，核酸酶處理，非離子活化劑抽提的細胞核在 2000 g 離心 10 分鐘。
15. 用帶寬松結合研件（B ) 的 Dounce 勻漿器將含有熱穩定的，核酸酶處理和非離子活化劑抽提過的細胞核的沉淀組份重懸浮于 0.45 倍體積的溶液 F 中。
16. 加 0.05 倍體積的 1 mol/L Tris-HCl (pH 7.5)，然后加 0.5 倍體積的 2 mol/L NaCl，使 NaCl 終濃度為 1 mol/L，將懸液在冰上孵育 10 分鐘。
17. 10000 g 離心 10 分鐘回收不溶復合物，重懸浮沉淀，像 15 和 16 步中那樣再次用 NaCI 抽提。
18. 10000 g 離心 10 分鐘將核基質-核膜孔復合物-核纖層組份收集于沉淀組分中，用溶液 F 重懸浮。 展開 | 