實驗方法原理
| 丙二醛（MDA）是由于植物官衰老或在逆境條件下受傷害，其組織或器官膜脂質發生過氧化反應而產生的。它的含量與植物衰老及逆境傷害有密切關系。測定植物體內丙二醛含量，通常利用硫代巴比妥酸(TBA)在酸性條件下加熱與組織中的丙二醛產生顯色反應，生成紅棕色的三甲川（3、5、5－三甲基惡唑2、4－二酮），三甲川最大的吸收波長在532nm。但是測定植物組織中MDA時受多種物質的干擾，其中最主要的是可溶性糖，糖與硫代巴比妥酸顯色反應產物的最大吸收波長在450nm處，在532nm處也有吸收。植物遭受干旱、高溫、低溫等逆境脅迫時可溶性糖增加，因此測定植物組織中丙二醛與硫代巴比妥酸反應產物含量時一定要排除可溶性糖的干擾。此外在532nm波長處尚有非特異的背景吸收的影響也要加以排除。低濃度的鐵離子能顯著增加硫代巴比妥酸與蔗糖或丙二醛顯色反應物在532、450nm處的吸光度值，所以在蔗糖、丙二醛與硫代巴比妥酸顯色反應中需要有一定的鐵離子，通常植物組織中鐵離子的含量為100－300μg·g－1Dw，根據植物樣品量和提取液的體積，加入Fe3＋的終濃度為0.5nmol· L－1。在532nm、600nm和450nm波長處測定吸光度值，即可計算出丙二醛含量。 | |
| 實驗材料 | |
| 試劑、試劑盒 | |
| 儀器、耗材 | |
| 實驗步驟 | 一、材料、儀器設備及試劑 1. 材料：植物葉片。 2. 儀器設備：離心機，分光光度計，電子分析天平，恒溫水浴，研缽，試管，移液管（1 ml、5 ml）、試管架，移液管架，洗耳球，剪刀。 3. 試劑：10％三氯乙酸，0.6％硫代巴比妥酸（TBA）溶液，石英砂。 二、實驗步驟 1. 丙二醛的提取 稱取受干旱、高溫、低溫等逆境脅迫的植物葉片1g，加入少量石英砂和10％三氯乙酸2 ml，研磨至勻漿，再加8 ml10％三氯乙酸進一步研磨，勻漿以4000r/min離心10min，其上清液為丙二醛提取液。 2. 顯色反應及測定 取4支干凈試管，編號，3支為樣品管（三個重復），各加入提取液2 ml，對照管加蒸餾水2 ml，然后各管再加入2 ml 0.6％硫代巴比妥酸溶液。搖勻，混合液在沸水浴中反應15min，迅速冷卻后再離心。取上清液分別在532、600和450nm波長下測定吸光度（A）值。 三、丙二醛含量計算： 由于蔗糖－TBA反應產物的最大吸收波長為450nm，毫摩爾吸收系數為85.4×10－3，MDA－TBA反應產物在532nm的毫摩爾吸收系數分別是7.4×10－3和155×10－3。532nm非特異性吸光值可以600nm波長處的吸光值代表。 按雙組分分光光度法原理，建立方程組，解此方程組即可求出MDA及可溶性糖濃度。 方程組：  1.按下式計算提取液中MDA濃度  2.按下式計算樣品中MDA含量  |
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