植物體內可溶性蛋白和非可溶性蛋白含量的測定實驗

植物材料經Tris－HCl緩沖液研磨、離心后，可溶性蛋白質溶于上清液中，非可溶性蛋

白則存在于沉淀部分。將沉淀用堿水解，則會得到非可溶性蛋白的提取液。蛋白質提取

液與考馬斯亮藍G－250反應呈藍色。在一定范圍內，蛋白質的含量與反應液在595nm波

長的吸光度呈正比，由此可求出蛋白質的含量。

植物葉片                                                          

考馬斯亮藍溶液                                                                  

HCl                                                                 

MgCl2                                                                  

EDTA                                                                  

二硫蘇糖醇                                                                  

牛血清蛋白標準母液                                                          

高速冷凍離心機                                                                  

分光光度計                                                                  

恒溫水浴                                                                 

研缽                                                                 

試管                                                                  

移液管                                                                 

洗耳球                                                          

稱取葉片0.3～0.5g，剪碎于冷凍過的研缽中加提取液3 ml，加少量石英砂，在

冰浴中快速研磨成勻漿，勻漿倒入離心管中，再用5 ml提取液（分兩次）將研缽

中勻漿洗入離心管，然后在10000 r/ min，4℃條件下離心20min，上清液即為

可溶性蛋白質提取液。

將離心所得的沉淀加3 ml 1mol·L－1NaOH溶液，在90℃恒溫水浴中加熱20min后，

在4000 r / min，4℃條件下離心10min，上清液即為非可溶性蛋白質提取液。

上述兩種上清液各取0.1 ml分別放入2支試管中，每管再加Tris緩沖液0.9 ml，

空白對照管加Tris緩沖液1 ml，然后各管分別再加入考馬斯亮藍染色液5 ml，

搖勻，在595nm波長處測定吸光度（A）值。

根據所測得的樣品液吸光度值，從標準曲線查出蛋白質含量，按下公式計算可

溶性蛋白質和非可溶性蛋白質含量。