無菌播種
（一）實踐目的
學習利用植物種子的胚軸進行愈傷組織培養的方法，主要是種子的無菌接種技術。
（二）實踐地點和時間
植物組培室、建議4學時
（三）實踐用具與材料
超凈工作臺、手術剪、槍狀鑷、酒精燈、酒精瓶、紗布、高壓滅菌鍋、電子天平、盛物籃、植物種子、70%酒精、0.1%升汞、ZT、2,4—D、大量元素、微量元素、瓊脂、蔗糖
（四）實踐內容
1、培養基制備
配制MS培養基：用大量元素、微量元素、維生素、鐵鹽配制，不加植物生長物質。
每升培養基加入30/L蔗糖、8g瓊脂，將pH值調節到5.8。
2、高壓滅菌
培養基入高壓鍋1.11-1.12Pa下穩壓滅菌23分鐘，制備無菌水，同樣高壓滅菌30分鐘，滅菌時將接種器械和紗布等放入高壓鍋一同滅菌。
3、無菌苗的制備
選擇健康飽滿的種子，流水下清洗干凈，置超凈工作臺上。無菌水沖洗2-3 次后，視材料情況，（較老較硬的種子）可剝離種皮后0.1%升汞滅菌，也可以（較嫩較軟的種子）先滅菌后再用器械無菌剝離種皮。
4、無菌播種
剝離種皮的種子用無菌水2-3次沖洗后，接種到已制備的MS培養基中，每瓶培養基接種一粒。做好標記，置于培養室光下培養，以后一周隨時觀察生長狀況。
5、清潔整理
清潔整理工作臺和組培室，并將器械等工具清洗整理好以備下次實訓使用。
（五）作業
寫出下胚軸愈傷組織培養實踐報告，并寫明下胚軸愈傷組織培養的操作要領
（六）評分標準
無菌播種操作正確，成活率高，污染率小。
胚軸接種
（一）實踐目的
在上次實踐基礎上進一步學習愈傷組織培養的胚軸切割轉接技術，加深對愈傷組織的理解。
（二）實踐地點和時間
植物組培室、建議4學時
（三）實踐用具與材料
超凈工作臺、手術剪、槍狀鑷、解剖刀或刀片、酒精燈、酒精瓶、紗布、高壓滅菌鍋、電子天平、盛物籃、記號筆。無菌播種已萌發青豆、無菌播種已萌發豌豆、大量元素、微量元素、維生素、鐵鹽、BA、2,4—D等母液。
（四）實踐步驟
1、制備培養基
為試驗觀察生長物質對愈傷組織的影響，加深理解，可做對比試驗，制備三種培養基
配方1 MS+0.1ml/LBA+0.5ml/L2.4—D
配方2 MS+0.5ml/LBA+0.1ml/L2.4—D
配方3 MS
2、下胚軸的切割轉接
（1）進行超凈工作臺開啟紫外燈、風機，換鞋、穿工作服、清潔雙手等常規操作。檢查酒精燈、酒精瓶是否該加酒精。
（2）將上周無菌播種成活，已經萌芽的種子放入超凈工作臺，仔細觀察種子，把污染的淘汰掉。
（3）灼燒鑷子和解剖刀刀片，冷卻，注意不能傷手。
（4）用工具將萌發種子放入培養皿內濾紙上，看清楚的胚軸位置，用鑷子和解剖刀刀片等器械除去子葉和胚根，切割胚軸成5mm左右切段。
（5）將切割下來的胚軸移入新培養基內，做好標記，三種配方分別移入標記，放入培養室培養。
3、清潔整理
按常規清潔整理超凈工作臺和實驗室，注意超凈工作臺不能用酒精擦拭，地面可用洗衣粉拖地，接種室可進行甲醛加高錳酸鉀熏蒸，為以后的實驗作準備。
（五）實訓作業
寫出本次實踐報告，并寫出自己的實踐效果和體會
（六）評分標準
胚軸識別清楚，胚軸切割轉接操作正確，愈傷組織分化成活高，污染小。