植物組織中碳水化合物含量的測定（Somogyi法）

測定植物碳水化合物的含量，通常用80梍85%的酒精抽提，在此濃度的酒精溶液中，還原糖和蔗糖溶解而淀粉沉淀。過濾后在溶液中測定可溶性糖（包括還原糖和蔗糖），在殘渣中測定淀粉。

還原糖可根據其還原能力大小直接測定其含量。蔗糖和淀粉經水解后生成還原糖，測得其含量，然后換算成蔗糖和淀粉。纖維素用稱重法，測得經酸、堿和有機溶劑處理過的樣品。

Ⅰ．還原糖含量的測定

原理

重要反應如下；

1．還原糖（如葡萄糖）在堿性溶液中能將Cu2  還原為Cu   ，產生Cu2 O沉淀。

2．加酸使KI與KIO3 作用，放出I2 來。

5KI KIO2 3H2 SO4 →3I2 3K2 SO4 3H2 O

3．放出的I2 立即與Cu2 O作用。

Cu2 O H2 SO4 →Cu2 SO4 H2 O

Cu2 SO4 I2 K2 SO4 →2CuSO4 2KI

4．多余的I2 用Na2 S2 O3 滴定。

2Na2 S2 O3 I2 →2NI N2 S4 O6

將結果與空白滴定相比較，即知消耗I2 量，可間接推算出測定液中還原糖含量。

儀器藥品

分析天平　　　　 臺天平

烘箱　　　　　　 水浴鍋

電動粉碎機 　　　容量瓶

移液管 　　　　　燒杯

三角燒瓶 　　　　漏斗

酒精 　　　　　　5%硫酸鋅

1%酚酞溶液：1g酚酞溶解在100ml95%酒精溶液中。

飽和氫氧化鋇溶液：將蒸餾水煮沸，除去水中二氧化碳，冷卻后加入固體Ba(OH)2 蓋好，過液，次日過濾。

銅碘試劑：

溶液A：取硫酸銅6.5g溶于100ml水中。

溶液B：取酒石酸鉀鈉12g，無水碳酸鈉20g，碳酸氫鈉25g溶于500ml水中。

溶液C：取碘酸鉀0.8g，碘化鉀10g，草酸鉀18g溶于200梍300ml水中。用時將溶液B倒入溶液A中，再倒入溶液C中，混合后稀釋至1000ml，混勻。

2.5mol/L H2 SO4 ：濃硫酸143ml加入水中，稀釋成1000ml。

淀粉指示劑：1g淀粉溶解在100ml水中，加熱使之溶解即可。

0.005mol/L硫代硫酸鈉標準溶液：參照實驗39。

操作步驟

1．抽提

將采回的植物樣品，分開部位，迅速放在60℃烘箱中烘干至恒重。剪碎后，放入電動粉碎機中粉碎。用電動分析天平分別稱取樣品1g，放入250ml三角燒瓶中，加入80%酒精50ml，放在70℃水浴鍋中抽提3小時，將上清液過濾（瓶內殘渣不要過濾出來），再往殘渣內倒入80%酒精20ml，繼續抽提3小時，過濾。如此提取3─5次，合并所有濾液，定容至500ml。最后將殘渣烘干，留作分析淀粉用。

2．澄清．

(1)吸取酒精提取液25ml，在水浴鍋上蒸干。若溶液有酸性，可先用固體碳酸鈉中和，以免酸對蔗糖的分解。

(2)蒸干后加入少量水，邊攪邊加入Ba(OH)2 2─10ml（用量根據不同樣品而定，如葉含色素多需用7─8ml，含色素少的可用6─7ml）。

(3)沉淀完全后，加入1滴酚酞指示劑，邊攪邊滴入ZnSO4 溶液，以沉淀鋇鹽，滴至紅色褪去，再滴Ba(OH)2 溶液，恢復淡紅色為終點。

(4)過濾并用蒸餾水洗滌沉淀，將濾液放入50ml容量瓶中釋至刻度，使可測定還原糖和蔗糖含量。

3．測定

(1)吸取糖液5ml（含糖在0.3─2.0mg），若糖液太濃可少吸些樣品，用水補足5ml，放入大試管或小燒杯中。

(2)加入銅碘試劑5ml，用量必須十分準確。

(3)蓋以表面皿，置沸水中保持100℃15分鐘。

(4)取出放入30℃水浴中，杯內溫度與水浴溫度相一致時為止。加入2.5mol/L H2 SO4 1ml蓋好，放置2分鐘，使沉淀物完全溶解，用水將蓋上的碘沖洗下來。

(5)用0.005mol/L Na2 S2 O3 滴定，邊滴定邊攪拌，滴至淡黃色時，加淀粉指示劑1ml，再滴至淡藍色時為終點。

(6)另取蒸餾水及銅碘試劑各5ml，做空白滴定，二者之差，即可由附表11中查得5ml糖液中的含糖量。假若用20g樣品，稀釋成500ml，吸取25ml，澄清后定容至50ml，最后吸取5ml滴定時，查得含糖量需乘因數1。　

Ⅱ．蔗糖含量的測定

原理

由于植物體中有還原糖和非還原糖（主要是蔗糖，因此要測定蔗糖時，需先經鹽酸水解后，測定其還原糖含量。從總可溶性糖含量減去還原糖含量即為蔗糖含量。

藥品

5mol/L NaOH

比重1.103的HCl：取濃鹽酸528ml，加水稀釋成1000ml。

操作步驟

吸取清潔后的可溶性糖液10ml，放入25ml容量瓶中，加入比重1.103HCl2ml，煮沸5分鐘，使之轉化成還原糖后用5mol/L NaOH溶液中和，用酚酞為指示劑加至淡紅色為止。中和后用水稀釋至刻度，吸取5ml測定其總可溶性糖含量。

蔗糖量=（總可溶性糖含量椈乖嗆浚羅0.95式中系數0.95是由于蔗糖水解時吸收了1分子水。

所以由附表11查得含糖量乘以2.5即得總可溶性糖含量。若用烘干樣品2g，則因素為25。

Ⅲ．淀粉含量的測定

原理

淀粉用酸水解轉化成葡萄糖后，測定其葡萄糖含量。根據葡萄糖含量換算成淀粉含量。

(C6 H10 O5 )n nH2 O→n(C6 H12O6 )

藥品

2%HCl溶液 　　　5mol/L NaOH溶液

操作步驟

取酒精抽提后的殘渣0.5g，放入三角燒瓶中，加2%HCl25ml，蓋上，在沸水浴鍋中沸騰3.5小時，用5mol/L NaOH中和，再依照測定還原糖的方法加入清潔劑，過濾，稀釋至250ml。吸取5ml測量定其還原糖含量。

葡萄糖含量×0.9=粗淀粉含量

式中系數0.9是由于淀粉(C6 H10 O5 )n 水解時吸收了n個分子水。

Ⅳ．粗纖維含量的測定

原理

測定粗纖維是用硫酸、堿、乙醇和乙醚相繼處理樣品。硫酸水解某些不溶解的碳水化合物（如淀粉和部分半纖維素）成為單糖。堿能使蛋白質轉變成可溶態并除去脂肪及溶解不能被酸溶解的半纖維素和某些木素。酒精和乙醚能抽出樹脂、單寧和色素及剩余的脂肪與部分蛋白質。

藥品

70─85% 乙醚

1.25%硫酸溶液：取比重1.84的濃硫酸13ml加水稀釋至1L。

1.25%氫氧化鈉：15g氫氧化鈉溶解在1L蒸餾水中，然后用標定其準確濃度，計算再應加蒸餾水量，使其濃度準確為1.25%。

操作步驟

1．將磨碎的樣品1─3g，裝入已知重量的稱量瓶中，在分析天平上準確稱重，無損失地倒入三角燒瓶里。如為新鮮樣品，須取同樣的樣品測定水分。此外，再于已知重量的稱量瓶中烘干濾紙。注意溫度不要過高，一般在80─90℃，防止濾紙烘焦影響重量。

2．在燒瓶外壁上，相當200ml溶量處，用玻璃鉛筆或紙條作一記號，然后將200ml1.25%的硫酸倒入瓶中，加熱至沸騰時再繼續30分鐘，加熱時防止激烈沸騰，應經常攪拌。每5分鐘要向瓶內倒入沸水，使其內容物達到記號，以保持酸的濃度不變。

3．煮沸之后，用帶有已知重量的濾紙漏斗過濾，并用熱蒸餾水沖洗燒杯及漏斗3─4次，直至濾液用石蕊試紙試驗呈中性反應為止。

4．用1.25%氫氧化鈉溶液將濾紙上的沉淀物完全洗入瓶內，將其加熱至沸騰再繼續30分鐘（操作同上）。

5．煮沸后冷卻，用原來所用已知重量的濾紙過濾，用蒸餾水沖洗2─3次，再用酒精沖洗2─3次直至濾液無色為止。若植物樣品（如葉子）含色素多時，除用酒精外，還要用乙醚沖洗至無色為止。

6．將濾紙和沉淀放入以前稱過這張濾紙的稱量瓶中，在100─105℃的烘箱中烘至恒重（用分析天平稱重）。

已知濾紙重量為Wp ，濾紙及纖維重量為Wt ，則粗纖維重量Wc =Wt －Wp ，再換算成百分含量。