植物組織內葉綠素的定量測定及吸收光譜

1. 目的
學習測定葉綠素總量及吸收光譜的技術

2. 器藥品及材料
菠菜葉或其他新鮮葉子，80%丙酮、研缽、瓷漏斗、分光光度計  、吸濾甁

3. 實驗步驟
a) 綠素提取
稱取0.5g鮮重切成小塊的菠菜葉片。放于干凈的研缽內。加20ml80%丙酮（V/V），把組織研成勻漿（大約研3分鐘），小心地把綠色液體轉移到一個有濾紙墊的瓷漏斗內。當過濾提取液時（抽濾），用另外10ml80%丙醇重復研磨勻漿3-4分鐘之后，如前一樣將第二次提取液到含第一次提取液的吸濾甁內。
第二次提取之后，緩緩就應該沒有葉綠素了，假如仍提取不完全，另用10ml80%丙酮重復研磨，將勻漿過濾到含有其他濾液的吸濾甁內。用10ml80%丙酮沖洗研缽和漏斗的邊緣以保證全部葉綠素被收集。為了便于計算葉綠素的量，用80%丙酮將濾液定容至50ml
如果實驗的植物  材料用量少于0.5g也可相應改變用于提取的80%丙酮的量，使最后體積依照每毫升丙酮提取10mg植物材料。
b) 葉綠素測定
將葉綠素提取液倒入比色杯中，用光電比色計在652毫微米測量光密度。以80%丙酮作空白對照計，以每克被提取的葉組織所毫克數。

D625：葉綠素提取液在波長652毫微米下的光密度讀數
V：80%丙酮一葉綠素提取液的最終體積
W：提取用的組織鮮重克數
在652毫微米處，葉綠素a和b交叉。同時在這種波長下34.5是兩種色素的比吸收系數。
c) 在80%丙酮中葉綠素的吸收光譜
以80%丙酮作空白對照，在400-700毫微米范圍內以20毫微米間隔測定并記錄葉綠素提取液的光密度讀數，在最大吸收部位，以5毫微米為間隔增加讀數。以光密度讀數為縱坐標，波長為橫坐標，繪葉綠素吸收光譜圖。