植物缺水程度的測定實驗

實驗方法原理：

當植物缺水時體內的脯氨酸含量增加。植物體內脯氨酸含量在一定程度上反映了植物體內的水分情況，因而可以作為植物缺水情況的參考性生理指標。

用人造沸石(Permutit)在pH1-7范圍內振蕩溶液可除去干擾的氨基酸或使其不與茚三酮反應（如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、纈氨酸、胱氨酸、苯柄氨酸、精氨酸等），脯氨酸與茚三酮試劑呈顯色反應，其含量與顏色的深淺呈正相關，可用分光度計測定。該法有專一性。

儀器、耗材：

721分光光度計                                                                  

水浴鍋                                                                  

離心機                                                                  

移液管                                                                  

燒杯                                                                  

容量瓶                                                                  

研缽                                                                 

冰醋酸                                                                  

具塞試管                                                                  

脯氨酸                                                                  

80%乙醇                                                                 

茚三酮試劑

實驗步驟：

二、儀器藥品

（1）721分光光度計；（2）水浴鍋；（3）離心機；（4）移液管；（5）燒杯；（6）容量瓶；（7）研缽；（8）冰醋酸；（9）具塞試管；（10）脯氨酸；（11）80%乙醇；（12）茚三酮試劑：將2.5g茚三酮溶于60ml冰醋酸和40ml 6M磷酸中，加熱（70℃）溶解，試劑至少在24小時內穩定。

三、實驗步驟

1. 繪制標準曲線

取脯氨酸溶于80%乙醇中，然后稀釋成下列濃度：0、1.0、2.5、5.0、7.5、10、15、20、25、30μg/ml。分別取標準溶液2ml，冰醋酸2ml，茚三酮試劑2ml加入試管中，用橡皮塞塞緊，于沸水浴中加熱15分鐘。用分光光度計于波長515nm下進行比色測定，以濃度0為空白對照。將測定結果以脯氨酸濃度為橫坐標，以光密度為縱坐標作標準曲線。

2. 植株樣品液的提取

選取植株功能葉片2g，用3ml 80%乙醇研磨（放少許石英砂），成漿狀，用80%乙醇洗研缽，將提取物和洗液置于試管中，80%乙醇總量為10ml。加蓋置于黑暗中室溫下提取24小時或水浴。

將提取液在放有活性炭的濾紙上進行過濾，重復過濾一次，除去色素和殘渣。將提取液置于試管中，加其重1/5的人造沸石強烈振蕩5分鐘。將上層液在離心機上離心10分鐘，取上清液備用。

3. 樣品溶液的測定

將離心后所得上清液，取2ml置于試管中，再加入2ml冰醋酸和2ml茚三酮試劑，加蓋密封，在沸水浴上加熱15分鐘。用3ml 80%乙醇代替樣品液作對照。在分光光度計上用515nm進行比色測定。讀出光密度后，從坐標曲線上求出樣品溶液中脯氨酸含量。

4. 結果計算：