植物DNA提取實驗

這是一種快速簡便提取植物總DNA的方法。先將新鮮的葉片在液氮中研磨，以機械力破碎細胞壁，然后加入十六烷三甲基溴化銨分離緩沖液，使細胞膜破裂。同時將核酸與植物多糖等雜質分開（十六烷三甲基溴化銨，簡稱CTAB，是一種陽離子去污劑），再經氯仿-異戊醇抽提去除蛋白，即可得到適合于酶切的DNA。

幼嫩的植物材料

液氮 CTAB抽提緩沖液 NaAC Tris-HCl  EDTA 氯仿 異戊醇 TE buffer

瓷研缽 離心管 離心機

一、實驗試劑及材料
 

1.  材料：幼嫩的植物材料0.5g左右。
 

2.  試劑：液氮，CTAB抽提緩沖液：2%CTAB(cetyl trimethyl ammonium bromide， 十六烷基三甲基溴化銨)，1%β-巰基乙醇 1.4mol/L Nacl，20mmol/L EDTA，100mmol/L Tris-Hcl pH8.0，3M NaAC，50mM Tris-HCl pH8.0，20mM EDTA，氯仿：異戊醇（24:1），異丙醇 ，70％乙醇，TE buffer。

二、實驗方法
 

1.  取0.5 g植物材料，雙蒸水洗凈，并用濾紙吸干。
 

2.  植物材料剪成1 cm左右碎片，放入預冷的瓷研缽中。
 

3.  加入液氮速冷，研磨成細粉（越細越好）。
 

4.  在5 ml離心管中加入抽提緩沖液2.5 mll，60℃保溫1小時。
 

5.  15 000 rpm，離心10分鐘。上清轉入另一個新的離心管中。
 

6.  加入等體積氯仿：異戊醇（24:1），混勻抽提至水乳膠融狀。
 

7. 15 000 rpm，離心10分鐘。
 

8.  上清轉入另一個新的離心管中。
 

9.  加入2/3倍體積預冷異丙醇，-20℃保溫30 min-1 h，緩緩混勻DNA成絮狀折出。
 

10.  15 000 rpm，離心10分鐘，棄上清。
 

11.  DNA沉淀用 70％乙醇洗2次。
 

12.  加入400 ul TE buffer溶解DNA。

真核細胞基因組較大，在操作中應注意動作輕柔，且在低溫下進行，以最大限度地減少機械和化學作用對DNA的剪切，從而獲得相對完整的DNA。

以下幾點可能會有所幫助： 1. 堅持使用2-巰基乙醇和PVP； 2. 取幼嫩一點的材料； 3. 低溫； 4. 快速； 5. 酚氯仿抽提離心后， 小心吸取上清液， 求質量而不求數量； 6. 壓軸的一點技巧， 酚氯仿抽提時盡可能充分混勻。