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  • 發布時間:2022-11-10 13:21 原文鏈接: 概述半不連續復制的相關實驗

      脈沖標記實驗(pulse-labelingexperiment)。以E.coli為材料,在培養時,培養基中加入同位素[3H]標記的dTTP,經30秒后,DNA剛開始復制,分離DNA,然后在堿中沉淀,變性,讓新合成的單鏈和模板鏈分開,再用CsCl密度梯度離心,以沉降的快慢來確定片段的大小,再檢測放射標記,結果表明被3H標記的片段,也就是新合成的片段,沉淀系數為20S左右,即都是長1000~2000Nt的DNA片段,而親本鏈要比它大20~50倍;第二組實驗是脈沖追逐實驗。目的是檢測早期合成的DNA片段以后的命運又是如何的?是依然如舊的短片段,還是連接成了長片段。這個實驗是先進行標記培養30秒,以后除去同位素繼續培養幾分鐘,再分離DNA在堿中沉淀,檢測結果。先合成的(帶標記)的DNA不再是短片段,而和總DNA的情況相似,沉淀系數為70S~120S較長的片段,這意味著剛開始合成的片段都是短片段,以后再連接成長片段,人們就把最初合成的短片段稱為岡崎片段(Okazakifragment)。 由于這個實驗的結果使得人們普遍認為:無論是前導鏈還是后滯鏈都是先合成小片段,然后在連成大片段,稱為“不連續復制“(discontinuousreplication)。然而由模型預測應該只有一半放射標記存在于小片段中,但實驗的結果卻全部是小片段DNA,為什么從前導鏈模板的3′-OH端延伸會不連續合成呢?人們在思考這個問題。1978年Olivera提出了半不連續(semidiscontinuous)復制模型,也就是說前導鏈上的合成是連續的,只有后滯鏈上的合成才是半連續的。

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