免疫膠體金標記技術是以膠體金作為示蹤標志物，應用于抗原抗體反應中的一種新型免疫標記技術。膠體金是由氯金酸水溶液在還原劑作用下，聚合成特定大小的金顆粒，顆粒之間因靜電作用形成一種穩定的膠體狀態，也稱金溶膠。膠體金由于具有膠體穩定性。蛋白質強吸附性和高電子密度等特性，在金標蛋白結合處，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒，當這些標記物在相應的配體處大量聚集時，肉眼可見紅色或粉紅色斑點，因而可用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中。
將特異的抗體或抗原以條帶狀固定在硝酸纖維素（NC）膜上的某一區域，該區域有控制線和顯示結果的測試線，當樣品加入膜一端（如加樣孔）時，借助毛細管作用向前移動，樣品沿著膜運動到達該區域后，樣品中相應的抗原或抗體與該抗原或抗體發生特異性結合而被截留，使該區域顯示一定的顏色，通過可目測的膠體金標記物得到直觀的顯色結果，而流離標記物則越過這一區域，達到自動分離的目的。該方法用肉眼即可判讀檢測結果，可實現目標物的快速檢測。膠體金免疫層析法就是利用膠體金本身的顯色特點結合免疫層析技術用來診斷特異性的待測物。
1．非競爭性作用原理：即雙抗體夾心法。檢測試劑是一種與乳膠顆粒或膠體金屬(一般采用膠體金)相偶聯的待測抗原的特異性配體(即抗體Abl)，它被沉積在結合墊上。當樣品(尿、血漿、全血等)加到樣品墊后，由于毛細管作用，樣品迅速浸透結合墊，檢測試劑被溶解，并隨著樣品流沿膜條向前移動。若樣品中存在待測抗原，它就會和檢測試劑中的抗體結合形成Ag—Abl。隨后，樣品通過固化有捕獲試劑(一般是待測抗原的另一表位特異性抗體Ab2)的測試線(testline)區域，將待測抗原一檢測試劑復合物捕獲形成Abl—Ag—Ab2復合物。樣品繼續前移，通過固化有抗Abl抗體(二抗Ab3)的質控線(control line)區域，形成Ab3一Abl—Ag—Ab2復合物。這種方式通常用于檢測帶有多個抗原位點的分析，如絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin，HCG)、人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)等。 [1]
2．競爭性作用的原理：檢測試劑仍是與乳膠顆粒或膠體金結合的抗體(Abl)，而捕獲試劑則是待測抗原或待測抗原的模擬物。若樣品中含有待測抗原，則樣品和檢測試劑形成復合物(Ag—Abl)，即樣品中的待測抗原將檢測試劑中的抗體完全飽和。隨后在通過已固化有捕獲試劑的區域時，不再發生反應，測試線處不顯色；樣品繼續前移。復合物(Ag—Abl)被已固化在質控線處的抗Abl的抗體(二抗Ab2)所結合，形成Abl—Ag—Ab2復合物，使質控線顯色。這種方式適用于檢測帶有單一抗原表位的小分子抗原，常用于違禁藥物的檢測等。