一、材料處理
1. 外植體選擇
在生長健壯、無病蟲害的盆栽橡皮樹植株上切取當年生嫩枝作為外植體。
2. 材料的處理與滅菌
將外植體去掉葉片及葉柄,剪成帶頂芽和腋芽的莖段,長約3 -5cm 左右。先用中性洗潔精溶液浸泡10 -20min ,自來水沖洗20 -30min 。在超凈臺上將預處理后的外植體用75 %酒精表面消毒,無菌水沖洗3 遍。再用2%次氯酸鈉浸泡振蕩滅菌10 -15min 或用0.1 %升汞溶液滅菌10 -15min ,無菌水沖洗3 -5 遍,濾去無菌水后濾紙吸干備用。
二、組培繁殖
1. 誘導培養
將滅過菌的頂芽和帶腋芽莖段接種在MS + BA2mg / L + IAA0.2mg / L 誘導培養基上。誘導培養30 -45 天后,誘導頂芽和腋芽萌芽,然后分化出叢生芽。
2. 增殖培養
將叢生芽切成單株接入MS + BA0.5mg / L + IAA0.05mg / L 增殖培養基中進行增殖培養,增殖培養30 -45 天后,分化出叢生芽,增殖率可達3 倍以上,且長勢好,葉片特性能保持原性狀。
壯苗培養增殖叢生芽生長在細胞分裂素濃度較高的培養基中,芽生長較弱,且芽體內又積累了一定量的細胞分裂素,此時剪下作為生根苗質量差,不利于生根,所以增殖叢生芽用于生根時,需進行壯苗培養。
壯苗培養基一般是在增殖激素的量上降低一半或更多。將增殖的叢生芽轉入l / 2MS + BA0.1mg / L + I AA0.01mg / L 壯苗培養基后,腋芽萌發減少,株高生長迅速,芽粗壯,節間距加長,葉片變大,20 -30 天后,幼苗莖高可達到3-5cm。
3. 生根培養
經壯苗培養的無根組培苗,當莖高為3 -5cm 時,從莖的基部切斷,轉到l / 2MS + NAA0.2mg / L 生根培養基進行生根培養。培養10 -15天后陸續有根產生,根系粗壯、整齊,組培苗長勢好,葉片濃綠有光澤。
三、基本培養基和培養條件
1. 基本培養基
所用的基本培養基為MS 培養基或大量元素減半的1 / 2MS 培養基,添加蔗糖或白糖30g / L ,瓊脂7g / L , pH 值為5.8 。
2. 培養條件
培養室溫度25 ℃ 土2 ℃ 、光照10 -12 小時/天、光強20001x 。
四、馴化與移栽
1. 移栽時間
橡皮樹在有加溫設備的溫室內可一年四季進行組培苗移栽,但在沒有加溫條件時,一般可在3 -11 月進行移栽,最佳時間為4 -6 月和9-11月,氣溫在12 ℃ -25 ℃ 之間,且空氣相對濕度較大,移栽的植株成活率較高。
2. 馴化與移栽
生根培養20 -30 天后,組培苗長到4-5 片葉、3-4 條根且苗高為5 -7cm ,植株株體較健壯時,將培養瓶置于溫室大棚的苗床上,利用自然光照進行過渡馴化,以增強幼苗對環境的適應能力。
馴化5-7 天后將幼苗取出,在清水中洗凈附著在根上的培養基。移栽基質由泥炭:珍珠巖:蛙石按體積比2 : 1 : l 配制而成,移栽穴盤采用72 孔或50 孔,基質裝滿孔穴,用50 %多菌靈500 倍液浸濕消毒處理。每穴移栽1 株組培苗后壓實基質。移栽完畢后將穴盤放置苗床上,澆足定根水。
3. 移栽后管理
移栽后第1 周要覆蓋塑料薄膜,第2 周逐漸增加通風,以便使組培苗盡快適應外部環境。第2 周后每天葉面噴霧1-2 次。棚內溫度保持在20 ℃ -25 ℃ ,相對濕度在90 %以上,用遮陽網遮去強光,橡皮樹生長很快,每周長出1片新葉。
移栽第4 -8 周,逐漸增加光照,結合澆水,每10 天可用0.3 % 尿素溶液和磷酸二氫鉀溶液進行葉面噴施。移栽2 個月后可定植,移栽成活率可達90 %以上。