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  • 發布時間:2020-07-07 15:01 原文鏈接: 正常大鼠施旺細胞的培養

    實驗材料:
    1. 生后2d大鼠的坐骨神經;
    2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素,pH7.2;
    3. 消化液:0.25%胰蛋白酶和0.03%膠原酶的混合消化液;
    4. 培養液a:DMEM培養液,加入0.02—0.025mol/L HEPES,pH7.2;
    5. 培養液b:DMEM,添加10%FBS;
    6. 培養器具:眼科剪、眼科鑷、網眼孔徑為60μm的尼龍濾網;

    實驗方法:
    1. 用70%乙醇消毒動物,斷頭處死,取坐骨神經,放入預冷的培養液a中;
    2. 將坐骨神經移入混合消化液中,在37℃水浴中振蕩消化15min;
    3. 換新鮮消化液,再次消化15min;
    4. 吸去消化液,用培養液b清洗2次,再加入新鮮培養液b,然后用吸管反復吹打。用孔徑為60μm的尼龍濾網,收集濾液,以2000r/min離心10min;
    5. 吸去上清液,用培養液b混懸沉淀細胞,將細胞種植于培養瓶或培養皿中,靜置培養24h;
    6. 加入10-5mol/L阿糖胞苷,繼續培養48—72h。當細胞生長形成單層時,進行傳代。


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