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  • 發布時間:2020-09-14 22:00 原文鏈接: 正常視網膜米勒細胞原代培養

    實驗材料:

    1. 材料來源:人眼、兔眼或者豬眼等;

    2. 清洗液:不含Ca2+和Mg2+的1×,添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素,pH7.2;

    3. 消化液:0.25%胰蛋白酶-100IU/ml透明質酸酶混合消化液;

    4. 消毒無菌的手術器械若干;



    實驗方法:

    1. 取材

    (1)取自人的供體眼球;

    1) 經常規消毒程序消毒后,于鋸齒緣后約1mm處環形切開眼球,去除前段及玻璃體;

    2) 用無齒小鑷子輕輕剝取視網膜組織,并用眼科小剪子剪去視乳頭周圍的視網膜及血管;

    3) 用液稍洗,去除黏附的色素上皮細胞。置于盛有平衡鹽溶液的培養皿中;

    (2)取自兔的供體眼球:當取出視網膜組織后,在解剖顯微鏡下用眼科小剪刀剪去髓放線部分及血管;

    2. 原代培養;

    1) 在處理完畢的視網膜組織中加入胰蛋白酶和透明質酸酶混合消化液,于37℃調間隙消化30min;

    2) 用有血清培養液終止消化。經吹打后,將細胞懸液離心(800r/min)5min;

    3) 用培養液重新懸浮細胞,并吸走絮狀的纖維樣物質;

    4) 按4×104~6×104個細胞/ml的密度進行接種;

    5) 以常規方法培養。24h后取出培養瓶,置換培養液,以去除沒有貼壁的其它細胞;

    6) 每周換液2次,在細胞分裂增長至基本融合成單層時傳代。

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