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  • 發布時間:2020-09-08 09:12 原文鏈接: 畢赤酵母表達(pichiapastorisexpression)實驗手冊(3)

    液體YPD培養基可常溫保存;瓊脂YPD平板在4℃可保存幾個月。加入Zeocin 100ug / ml,成為YPDZ培養基,可以4℃條件下保存1~2周。
    2.4 YPDS + Zeocin 培養基(Yeast Extract Peptone Dextrose Medium):
    yeast extract 1%
    peptone 2%
    dextrose (glucose) 2%
    sorbitol 1 M
    +agar 2%
    + Zeocin 100 μg/ml
    不管是液體 YPDS培養基,還是YPDS + Zeocin 培養基,都必須存放4℃條件下,有效期1~2周。
    2.5 MGY
    Minimal Glycerol Medium (最小甘油培養基)
    (34%YNB;1%甘油;4*10-5%生物素)。將800ml滅菌水、100ml的 10*YNB母液、2ml的500*B母液和100ml的10*GY母液混勻即可,4℃保存,保存期為2個月。
    2.6 MGYH
    Minimal Glycerol Medium + Histidine (最小甘油培養基 + 0.004%組氨酸)
    在1000ml的MGY培養基中加入 10ml的100*H母液混勻,4℃保存,保存期為2個月。
    2.7 RD
    Regeneration Dextrose Medium (葡萄糖再生培養基)
    (含有:1mol/L的山梨醇;2%葡萄糖;1.34%YNB;4*10-5%生物素;0.005%氨基酸)
    1. 將186g的山梨醇定容至700ml,高壓滅菌;
    2. 冷卻后于45℃水浴;
    3. 將100ml的10*D、100ml的10*YNB;2ml的500*B;10ml的100*AA等母液和88ml無菌水混勻,預熱至45℃后,與步驟2 的山梨醇溶液混合。4℃保存。
    2.8 RDH
    Regeneration Dextrose Medium + Histidine (葡萄糖再生培養基 + 0.004%組氨酸)
    在RD培養基配制的第三步中,在加入10ml的100*H母液,同時無菌水的體積減少至78ml即可,其余配制方法與RD相同。4℃保存。
    2.9 RD及RDH平板的制備
    1. 將186g的山梨醇和15-20g瓊脂粉定容至700ml,高壓滅菌;冷卻后于60℃水浴;
    2. 參照RD/RDH液體培養基配制的步驟4,將100ml的10*D、100ml的10*YNB;2ml的500*B;10ml的100*AA等母液、(10ml的100*H母液)和88(78)ml無菌水混勻,預熱至45℃后,與步驟1的山梨醇/瓊脂液混勻;
    3. 迅速制備平板。4℃可保存數月。
    2.10 RD及RDH 的TOP 瓊脂的制備(常用于酵母菌的包被)
    1.將186g的山梨醇和 7.5~10g瓊脂粉定容至700ml,高壓滅菌;冷卻后于60℃水浴;
    2.參照RD/RDH液體培養基配制的步驟4,將100ml的10*D、 100ml的10*YNB;2ml的500*B;10ml的100*AA等母液、(10ml的100*H母液)和88(78)ml無菌水混勻,預熱至 45℃后,與步驟1的山梨醇/瓊脂液混勻;
    3.將該TOP瓊脂置于45℃水浴冷卻、保溫,備用。
    2.11 MD與MDH
    Minimal Dextrose Medium +(Histidine) 最小葡萄糖培養基 +( 0.004 %組氨酸)
    (含有:1.34%YNB;;4*10-5% 生物素;2%葡萄糖)
    1. 100ml的10*YNB;2ml的500*B和100ml10*D母液,用800ml的無菌水定容至1000ml即可;
    2. 如配制MDH,可在上述的MD中加入10ml的100*H即可;
    3. 如配制平板,可無菌水的滅菌前,加入15~20g的瓊脂。4℃可保存數月。
    2.12 SOC培養基:
    Trypton l%
    Yeast Extract 0.5%
    NaCl 0.05%
    Glucose (1mol / L) 2%
    121℃高壓滅菌 20min,冷卻后,4℃保存

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