毛細管電泳色譜儀(CE)紫外檢測器是基于物質對紫外吸收進行檢測,是zui成熟的檢測器,在CE中應用zui廣。
一、工作原理:
入射紫外光通過樣品時,被吸收的多少符合朗伯-比耳定律。
檢測點在毛細管的末端,檢測點的毛細管的外涂層要燒掉。
二、檢測方法:
1、固定波長:
光源為低紫外氘燈,用濾光片獲得固定波長的光。
2、可變波長:
光源為氘燈或鎢燈,用單色器(棱鏡或光柵)獲得連續可調波長的光。
3、快速掃描:
(1)利用線性二極管陣列快速捕獲紫外光。
(2)利用硅光電倍增管作快速掃描。
4、間接測定:
紫外間接測定是在緩沖液中加入有紫外吸收的添加劑,溶質因無紫外吸收而產生倒峰。
可解決許多直接檢測所不能解決的問題,主要用于離子分析。
三、特點:
1、通用性好,特別是對蛋白質的適用性很強。
2、靈敏度不足。
四、提高靈敏度的方法:
由于CE檢測池的光路長度為毛細管內徑,一般不超過100μm,小內徑的毛細管限制了紫外檢測器的靈敏度,可采用以下幾種方法來提高靈敏度。
1、優化測定波長:
通過測定不同波長下的信噪比來選擇zui優測定波長,以提高靈敏度。
2、減少檢測噪音:
(1)提高光源強度。
(2)采用聚焦和狹縫等減少背景光的影響。
(3)采用良好的信號放大系統。
3、擴展吸光光路長度:
(1)為了克服圓柱形毛細管表面引起的散射、失真等不利的光學特性和增加光路長度,可采用矩形、扁形、Z形和泡型等特殊毛細管。當然柱效會有所下降。
(2)對于普通毛細管,可采用軸向照射和多次反射來增加光路長度。
1)軸向照射:將激光光束從毛細管末端沿管軸方向入射,在毛細管側面進行檢測。
2)多次反射:在毛細管壁鍍上銀,分別開入射窗和出射窗。當入射光以特定角度入射后,在毛細管內反射30~40次后從出射窗口射出。