1974年合成第二代喹諾酮類代表藥吡哌酸(pipemidic Acid)，對G-桿菌的作用也包括了部分綠膿桿菌，抗菌活性較前者提高，口服少量吸收，但可達到有效尿藥濃度，不良反應明顯減少，因此用于尿路和腸道感染。
1979年合成第三代喹諾酮藥：諾氟沙星(Norfloxacin氟哌酸)。它是4-Quinolone結構改造衍生物，在6位上加上一個氟(F)后，增加了脂溶性，增強了對組織細胞的穿透力，因而吸收好，組織濃度高，半衰期長，更大大增加了抗菌譜和殺菌效果。構效關系的研究進一步展開，新的氟喹諾酮類藥物如雨后春筍，成為一個十分活躍的研究領域。氟喹諾酮類對G-桿菌，包括綠膿桿菌均有良好抗菌作用，對G+球菌也具一定抗菌活性，尤其對耐藥G-桿菌，仍可呈現敏感。