在硒的生物化學作用被逐漸認識的今天,要求提供精確的分析數據.由于經典的熒光光度法測定硒,條件比較苛刻,本文采用氫化物發生原子吸收法測定了人體、全血頭發樣品中硒的含量。在確定了儀器的zui佳工作條件的基礎上,著重研究了測定全血,頭發樣品中硒的前處理方法及干擾試驗.本法相對標準偏差小于0.5%,標準加入回收率在95.7~102%之間,適用于開展流行病學調查和臨床分析的研究.
實驗部分
一 儀器及工作條件
原子吸收光譜儀
氫化物發生器（WHG-103A型）
金屬套玻璃高效霧化器（WNA-1型）
硒空心陰極燈
電熱石英管
波長196.0nm,燈電流5mA,狹縫1.3nm,空氣流量1.00kg·cm-2, 乙炔流量0.05kg· cm-2 ,測量方式直示,計算方是用峰高,校準曲線或標準加入方法曲線,計算時間13s,延遲時間0.5s,進樣量3ml,載氣流速Ar100ml·min-1 ,進樣時間30s,反應時間15s.
二 試劑
硒（IV）標準貯備液:1000ug·ml-1,由高純硒粉配置.硒中間標準溶液5ug·ml-1.
硼氫化鉀:1.5%溶液中含有0.1%的氫氧化鈉,用時現配.
亞沸蒸餾水
三 試樣處理
準確取0.20ml血液試樣或0.2000g頭發試樣于20ml（12mm）刻度石英試管中,加入2ml濃HNO3,放置過夜,次日在加入0.5mlHClO4,置于160oC恒溫沙浴中加熱消化至溶液成呈淡黃色后（約4h）,加入1mlH2O2,繼續加熱消化至溶液清亮（約1h）取出,測定前用HCl（30%）溶液定容.
于試樣處理的同時制備試劑空白.
四 校準曲線的繪制
校準曲線
用微量定量取樣器吸取硒中間表準溶液,0,10,30,50和70ul分別放入50ml量瓶中,用HCl（30%）溶液稀釋到刻度,獲得濃度分別為0,1.0,3.0,5.0和7.0ng·ml 硒的標準系列溶液.
標準加入法曲線
移取10ml試樣+10mlHCl（30%）:10ml樣液+10ml 2ng·ml-1硒標準溶液; 10ml樣液+10ml 10ng·ml-1硒標準溶液; 10ml樣液+10ml 14ng·ml-1硒標準溶液,制成均含HCL（30%）溶液的硒標準加入法系列溶液.
結果與討論
一 試樣前處理方法的考察
試樣的前處理是至關重要的.目前測定硒的前處理方法普遍采用濕法消化,常用的分解裝置有高型燒杯,三角錐瓶,高壓分解坩鍋和配有回流冷凝器的凱氏燒杯.由于前兩種裝置分解式樣時,使用的酸量較大,硒易揮發損失,而且這些方法得消化液均需要轉移定容,易引起較大的誤差.本法采用刻度石英試管,HNO3+HclO4+H2O2+HCl氧化還原體系,于160oC恒溫沙浴中消化血液頭發試樣.由于石英試管上端能起到空氣的冷凝回流作用,因而試劑不易揮發,試樣消化完全.與配有冷凝管的燒瓶消化法比較,具有操作簡單,試劑和式樣用量少,減少轉譯的誤差等優點.本法與水冷凝管的凱氏燒瓶消化法比較的結果見表1.
表1 分解方法的比較
統計參數* | 本法 | 水冷凝管燒瓶法 | ||
全血 （ng·ml-1 ） | 頭發 （ng·g-1 ） | 全血 （ng·ml-1 ） | 頭發 （ng·g-1 ） | |
X+SD | 144.5+6.9 | 66.5+13.0 | 145.0+7.1 | 664.8+14.4 |
N | 50 | 50 | 50 | 50 |
RSD% | 4.8 | 2.0 | 4.9 | 2.2 |
* X: 硒的平均值 n: 測定次數 SD: 標準偏差 RSD:相對標準偏差
二 常見共存例子的干擾試驗
我們調查了存在于血液,頭發中的25種共存例子對痕量硒測定的干擾試驗,結果表明,下述離子（ug·ml-1）不干擾5ng·ml-1硒的測定:Ca（700）, Na 、Fe3+（500）, Mg、K（200）, Cu、Zn（5）,Ni、Mn、Al（1）, Cr6+、Co（0.2）, Mo、As3+、Bi、Sr、Ti、Hg、Sn2+ （0.1）,Si、Ba（0.5）,Pb（0.06）,Cd（0.05）以及NO3-、ClO4-、H2O2（0.5M）.
銻（Ⅲ）0.05 ug·ml-1不干擾,含量≥0.1 ug·ml-1有負干擾,但血液頭發中銻的含量一般都低于此值,再者經過了相對的稀釋,它不會給本法測定硒帶來影響.當HNO3、HClO4、H2O2的濃度小于0.5M
時也不干擾測定.原因是鹽酸介質保持了較佳濃度,可是試樣中的Fe、Cu和Ni等重金屬元素形成絡合物避免其干擾（1） ,這些與文獻（3） ,報道是一致的.另外還采用低濃度硒的校準曲線,使試樣中基體元素的濃度得到相對稀釋（100倍以上）,因而更有效地消除血液,頭發試樣中基體元素對測定硒的干擾.
三 校準曲線法與標準加入法結果比較
在擬定的zui佳條件下, 準曲線法和標準加入法（圖1）,對試樣進行了測試.實驗表明,盡管血液,頭發試樣中含有較復雜的基體元素,但用上述兩種校準曲線所求得硒的含量是一只的.
從圖1可以看出,三種校準曲線的斜率基本相同,回歸分析后,相對系數均在0.9998以內.這也證明, 血液,頭發中的基體元素對硒的測定均無影響.
四 本法的回收率及精密度
在血液,頭發試樣中分別添加硒標準,按試樣處理步驟處理后進行測定,其回收結果見表2.五個平行樣品的測定,方法的精密度在1.2~4.8%以內.
經過分析商業部食品檢測科學研究所提供的一級標準物質（GBW08551）豬肝中的硒含量,標準值為0.94+0.05 ug·g-1 ,本法測定值為0.93+0.04 ug·g-1 ,準確度是令人滿意的.
表 2 硒的回收率
樣品 | 原含Se量（ppb） | 加入Se量（ppb） | 測得Se量（ppb） | 回收率（%） |
空白 | - | 100 | 100 | 100 |
血液A | 144.4 | 100 200 | 241.3 347.8 | 96.9 102 |
血液B | 246.0 | 200 300 | 442.8 544.9 | 98.4 99.6 |
頭發C | 356.6 | 100 200 | 457.5 548.0 | 101 95.7 |
頭發D | 665.1 | 200 300 | 864.6 95902 | 99.8 98.0 |
五 應用
用本法測定人體全血（177例）頭發（327例）中硒的含量,其結果與文獻報道值相近（4~11） .結果見表3.
表 3 人體全血,頭發硒平均水平