免疫電泳實驗
免疫電泳實驗是先將抗原物質在瓊脂凝膠中做電泳分離,然后于凝膠槽中加入抗體血清。使抗原抗體進行雙向擴散,在比例適宜部位形成特異的抗原抗體沉淀弧線。每條沉淀弧線代表一組抗原抗體復合物,故可用抗原成分分析;且可以根據其遷移率與抗體所出現的特異反應進行鑒定。
1、材料
(1)待檢標本(抗原):正常人血清;
(2)抗體:正常人血清的家兔免疫血清;
(3)1.5%離子瓊脂(系用巴比妥緩沖液配制的);
(4)電泳儀;
(5)pH8.6、離子強度0.05M巴比妥緩沖液配方:巴比妥1.84克,巴比妥鈉10.3克,加蒸餾水1000毫升,調pH至8.6;
(6)其它:載物玻片,直徑3毫米打孔器,20mmⅹ2mm玻璃鑄型,微量進樣器。
2、方法
(1)取載物玻片(7.5ⅹ2.5厘米)加上3.5毫升1.5%瓊脂凝膠,制成2毫米厚的瓊脂板;
(2)按圖位置,在瓊脂板未凝固時,放入抗血清槽鑄型,注意勿使鑄型全部浸入瓊脂中,待凝固時再打孔;
(3)加待檢標本:用微量進樣器往孔中加1—5微升;
(4)電泳:電壓9—7伏/厘米,泳動15—20小時;
(5)電泳后取出抗血清槽鑄型,加入抗血清,進行雙擴散,一般在24小時內沉淀弧出全;
(6)觀察結果:或描繪、拍照或進行染色,染色后的標本便于結果分析及保存。