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  • 發布時間:2019-09-30 16:03 原文鏈接: 流式細胞儀術檢測各類免疫細胞的數量

    流式細胞術(FCM)是一種高速度、高靈敏度、高精度和高分辨率的自動分析細胞的高新技術。主要用于定量分析單細胞表面、細胞內抗原和對分子水平的核酸含量的測定。

    試劑及材料

    1. FITC(或PE)標記的抗CD的mAb及正常小鼠IgG

    2. 細胞洗液:含2%BSA、0.1%NaN3 的PBS。

    3. 固定液:25%戊二醛3.2ml,葡萄糖2g加無BSA的細胞洗液至100ml。

    4. 流式細胞儀

    操作方法

    1. 于各實驗管中分別加入106 PBMC,1500r/min離心3min,棄上清;

    2. 分別加入熒光素標記的抗CD的mAb 20ml,混勻;

    3. 4℃孵育60min, 加入細胞洗液 , 1500r/min離心3min,反復洗滌3次;

    4. 用細胞洗液恢復體積至0.5ml,加入固定液20ml,混勻;

    5. 上機檢測。

    注意事項

    由于FITC(或PE)標記的抗CD的mAb可以從試劑公司方便購得,且方法穩定可靠,故在此介紹的是直接免疫熒光法的操作步驟。當然,也可采用間接直接免疫熒光法,操作方法同前。


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