流式細胞術(FCM)是一種高速度、高靈敏度、高精度和高分辨率的自動分析細胞的高新技術。主要用于定量分析單細胞表面、細胞內抗原和對分子水平的核酸含量的測定。
試劑及材料
1. FITC(或PE)標記的抗CD的mAb及正常小鼠IgG
2. 細胞洗液:含2%BSA、0.1%NaN3 的PBS。
3. 固定液:25%戊二醛3.2ml,葡萄糖2g加無BSA的細胞洗液至100ml。
4. 流式細胞儀
操作方法
1. 于各實驗管中分別加入106 PBMC,1500r/min離心3min,棄上清;
2. 分別加入熒光素標記的抗CD的mAb 20ml,混勻;
3. 4℃孵育60min, 加入細胞洗液 , 1500r/min離心3min,反復洗滌3次;
4. 用細胞洗液恢復體積至0.5ml,加入固定液20ml,混勻;
5. 上機檢測。
注意事項
由于FITC(或PE)標記的抗CD的mAb可以從試劑公司方便購得,且方法穩定可靠,故在此介紹的是直接免疫熒光法的操作步驟。當然,也可采用間接直接免疫熒光法,操作方法同前。