實驗簡介
植物的基因組大小及 DNA 倍性和植物的品系、性狀及營養和藥用價值有密切聯系。檢測植物的基因組大小和 DNA 倍性在植物的鑒定、雜交育種等領域有重要意義。流式細胞儀可在半小時內完成從樣本制備染色、植物基因組大小和 DNA 倍性測定全過程,以其方便快捷得到廣泛應用。CytoFLEX 流式細胞儀具有優異的熒光分辨能力,可輕易區分不同大小的基因組,多達 10 的 7 次方線性檢測范圍,可更好地檢測自然界或育種過程中廣泛存在的多倍體現象。
材料與方法
? 試劑
? 樣品制備
| Sample Type | |
| Species | 多年生植物東南景天的嫩葉 |
| Age of specimen | 新鮮 |
| Prep Method | 1. 配置溶液 ● 溶液 I :0.1 mol/L 檸檬酸 4.2 g, 0.5% 吐溫 20,定容至 200 mL, 4℃ 下保存備用 ● 溶液 I I :0.4 mol/L 磷酸氫二鈉 28.65 g,PI 20 mg, 定容至 200 mL, 室溫下保存備用 2. 取 20 mg 洗凈去除中脈的新葉置于塑料培養皿中 , 移取 , 用雙面刀片將葉片切碎; 3. 用 1 mL 移液槍吸取切好的樣品經 350 目尼龍篩網過濾到 1.5 mL Eppendorf 管中; 4. 對所得濾液在 13000 r/min 的條件下離心 30 s; 5. 用 1 mL 移液槍移去上清至 0.1 mL 處 , 加入新鮮的Ⅰ溶液 200 μL 懸浮沉淀;在準備用流式細胞儀檢測樣品時 , 再向樣品中加入 600 μL 溶液 I I |
數據分析
通過 PI-A/PI-H 雙參數散點圖排除黏連細胞,根據 2 倍體的位置判斷其他倍體的位置。