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  • 發布時間:2019-09-30 16:32 原文鏈接: 流式細胞術(FlowCytometry,FCM)

    流式細胞術(Flow Cytometry, FCM)是一種在功能水平上對單細胞或其他生物粒子進行定量分析和分選的檢測手段,它可以高速分析上萬個細胞,并能同時從一個細胞中測得多個參數,與傳統的熒光鏡檢查相比,具有速度快、精度高、準確性好等優點,成為當代最先進的細胞定量分析技術。流式細胞儀(Flow Cytometer, FCM),又稱熒光激活的細胞分選器(fluorescence activated cell sorter,FACS),作為進行流式細胞分析的儀器,它集電子技術、計算機技術、激光技術、流體力學、圖像技術、細胞生物學免疫學理論于一體,是一種非常先進的檢測儀器,被譽為生物醫學實驗室的“CT”。流式細胞術已經成為一種用途最廣泛和最先進的細胞分析技術,在細胞生物學、血液學、腫瘤學、免疫學等基礎和臨床醫學領域發揮著重要作用。
    流式細胞計的基本結構流式細胞計主要由流動室與液流系統、激光源與光學系統、光電管與檢測系統、計算機與分析系統四部分組成。
    一、流式細胞儀的細胞分析原理
    首先將待測細胞被制成單細胞懸液,經特異性熒光染料染色(間接免疫熒光染色或直接免疫熒光染色)后加入樣品管中,在氣體壓力推動下進入流動室,流動室內充滿鞘液,在鞘液的作用下,細胞排成單列從流動室噴嘴口噴出,并被鞘液包繞形成細胞液柱。這種同軸流動的設計,使得樣品流和鞘液流形成的流束始終保持著一種分層鞘流的狀態。鞘液和樣品流組成一個圓形的流束,一起自噴嘴的圓形寶石孔噴射出來,進入流動室,與水平方向的激光光束垂直相交,該區稱為測量區。利用樣品流和鞘流的氣壓差的層流原理,使細胞依次排列成單行,每個細胞以均等的時間依次通過測量區,被熒光染料染色的細胞受到強烈的激光照射后發出熒光,同時產生散射光。細胞發出的熒光信號和散射光信號,同時被熒光光電倍增管接收,被積分放大反轉換為電子信號,再經過信號放大、加工處理后存儲于計算機中,進而利用相關軟件進行多參數統計分析,從而實現了細胞的定量分析。


    4-2 流式細胞儀分選原理示意圖
    二、 流式細胞儀的細胞分離原理
    流式細胞儀對細胞的分選是通過流束形成含有細胞的帶電液滴來實現的。在具分選功能的流式細胞儀流動室的噴嘴上裝備有一個超聲振蕩壓晶體片,這個振蕩裝置可將自噴嘴射出的液束破碎成千萬個小滴,流動的細胞同時也就被分散在這些小水滴中。這時給流束一個電脈沖信號,使小水滴就全部帶上電荷。當帶有不同電荷的細胞液流經一對帶正、負幾千伏恒定靜電電場的偏轉板時,帶電的小水滴就根據自身所帶的電荷性質產生偏轉,落入各自的收集容器中,不帶電荷的水滴就進入中間的廢液容器中,從而實現了細胞的分選(參見圖21-2)。


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