流式細胞計量術（基于熒光的蛋白質分析）實驗

細胞初始抗體

PBS 溶液疊氮化鈉

1. 在培養皿中加入 1 mmol/L EDTA/1 mmol/L EGTA 的 PBS 溶液，輕搖，收獲細胞。4℃ 1000 g 離心 5 分鐘。

2. 用 4 ml PBS+0.1% 疊氮化鈉和 1% BSA 或熱的滅活血清洗細胞。

3. 計數細胞，每個樣品的最小濃度為 1X10⁶/ml。

4. 將樣品等分為 50 μl 小體積的含 0.1% 疊氮化鈉和 1% 熱的滅活血清或 1% 的 PBS 溶液。

5. 加合適滴度的初始抗體，用系列稀釋確定合適滴度范圍。

6. 在冰上孵育細胞 30 分鐘。

7. 在含疊氮化物和 BSA 或熱的滅活血清的 4 ml PBS 中洗細胞。

8. 1000 g 離心細胞 5 分鐘。

9. 在相近體積的含 0.1% 疊氮化物和 1% BSA 中重懸細胞，終濃度為 1X10⁶~5X10⁶ /ml。