可以參考一下《水和廢水監測分析方法》(第四版)649頁之后的幾段。
也可以參考一下這篇文章《HPLC測定飲用水中藻類葉綠素含量》
作者: ysqlym 發布日期: 2008-08-19
一般用測定葉綠素a來表示藻類的含量(分光光度法)
一、材料用具及儀器藥品
菠菜葉片、721分光光度計、天平、研缽、剪刀、容量瓶(25ml)、漏斗、濾紙、乙醇(95%)
二、原理
葉綠素a、b在波長方面的最大吸收峰位于665nm和649nm,同時在該波長時葉綠素a、b的比吸收系數K為已知,我們即可以根據Lambert Beer定律,列出濃度C與光密度D之間的關系式:
D665=83.31Ca+18.60Cb…………………………….(1)
D649=24.54Ca+44.24 Cb…………………………….(2)
(1)(2)式中的D665、D649為葉綠素溶液在波長665nm和649nm時的光密度。
為葉綠素a、b的濃度、單位為每升克數。
82.04、9.27為葉綠素a、b在、在波長665nm時的比吸收系數。
16.75、45.6為葉綠素a、b在、在波長649nm時的比吸收系數。
解方程式(1)(2),則得 :
CA=13.7 D665—5.76 D649………………………(3)
CB=25.8 D649—7.6 D665……………………… (4)
G=CA+CB=6.10 D665+20.04 D649………(5)
此時,G為總葉綠素濃度,CA、CB為葉綠素a、b濃度,單位為每升毫克,利用上面(3)(4)(5)式,即可以計算葉綠素a、b及總葉綠素的總含量。
三、方法步驟
1.稱取0.1克新鮮葉片,剪碎,放在研缽中,加入乙醇10ml共研磨成勻漿,再加5ml乙醇,過濾,最后將濾液用乙醇定容到25ml。
2.取一光徑為1cm的比色杯,注入上述的葉綠素乙醇溶液,另加乙醇注入另一同樣規格的比色杯中,作為對照,在721分光光度計下分別以665nm和649nm波長測出該色素液的光密度。
計算結果:
葉綠素a含量(mg/g. FW)=
葉綠素b含量(mg/g.FW)=
葉綠素總量(mg/g.FW)= 見鏈接
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