試劑、試劑盒 透析緩沖液牛血清白蛋白(BSA) 或σ32 溶液
儀器、耗材 干凈的石英比色皿分光光度計
實驗步驟
材料與設備
牛血清白蛋白(BSA) 或σ32 溶液,濃度約為 1mg/ml
干凈的石英比色皿
分光光度計,可在 205nm 和 280nm 讀數的
試劑
透析緩沖液
(配方,見"試劑的配制",PP.184~189)
操作程序
1)BSA 溶液(~1mg/ml) 或未知濃度的待測純蛋白溶液對 2X400 ml 的透析緩沖液透析 3~5 h, 充分攪拌。
2) 測定 A280nm(應在 0.25~1.0 范圍內)。
3) 小心地用透析緩沖液將蛋白溶液稀釋 30 倍(例如,200ul 樣品加 5.8 ml 透析緩沖液),測定 A205nm。
4) 用公式 E(1 mg/ml)205nm=27.0+120(A280/A205),計算 E(1 mg/ml)205nm。
5) 計算:蛋白濃度=A205/E(1 mg/ml)205nm=
6) 計算:E(1 mg/1 ml)280nm=A280/蛋白濃度=