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  • 發布時間:2020-08-11 12:52 原文鏈接: 消光系數的測定(Scopes法)實驗

    試劑、試劑盒 透析緩沖液牛血清白蛋白(BSA) 或σ32 溶液

    儀器、耗材 干凈的石英比色皿分光光度計

    實驗步驟

    材料與設備


    牛血清白蛋白(BSA) 或σ32 溶液,濃度約為 1mg/ml


    干凈的石英比色皿


    分光光度計,可在 205nm 和 280nm 讀數的


    試劑


    透析緩沖液


    (配方,見"試劑的配制",PP.184~189)


    操作程序


    1)BSA 溶液(~1mg/ml) 或未知濃度的待測純蛋白溶液對 2X400 ml 的透析緩沖液透析 3~5 h, 充分攪拌。


    2) 測定 A280nm(應在 0.25~1.0 范圍內)。


    3) 小心地用透析緩沖液將蛋白溶液稀釋 30 倍(例如,200ul 樣品加 5.8 ml 透析緩沖液),測定 A205nm。


    4) 用公式 E(1 mg/ml)205nm=27.0+120(A280/A205),計算 E(1 mg/ml)205nm。


    5) 計算:蛋白濃度=A205/E(1 mg/ml)205nm=


    6) 計算:E(1 mg/1 ml)280nm=A280/蛋白濃度=


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