液相色譜儀色譜柱的分離條件

 多數液相色譜儀色譜柱有很寬的試驗條件范圍，但具體應用又受到限制，主要是pH值、柱溫和流動相的選擇。

  傳統硅膠為基質的鍵合相要求pH值在2~8之間，極端pH值的流動相能“溶解”硅膠，使鍵合相流失。結構非堿性組分的保留不斷減少，堿性組分的保留增加，引起堿性組分峰變寬。如果一定要用高或低pH值的流動相，可加保護柱。保護柱裝在泵和進樣閥之間，用分析柱相同的填料填裝，或用普通硅膠。硅膠飽和了流動相，減少了分析柱填料的損失。保護柱不要求柱效高，用價格低的一般硅膠疏松的填裝，按期檢查硅膠的溶解情況。用保護柱也有不利的影響，即新流動相難以平衡，保留時間不穩定或穩定慢。使用了保護柱一定要加流路過過濾器，以防止硅膠微粒引起的麻煩。目前很多檢測儀器廠商開發了滿足低或高pH值緩沖液的色譜柱填料，具有很好的穩定性。

  以硅膠為基質的柱和陰離子交換柱超過60℃后，會增加對流動相中化學物質的吸附。在高溫下用小顆粒柱引起床塌陷，降低柱效，改變峰形。

  有些流動相中的溶劑不能用于某些柱，如小顆粒的聚苯乙烯填料不能用于非水的排阻色譜。另一方面，有些柱與某些溶劑一旦達到平衡，不要隨意改用其它溶劑。