液相色譜峰分叉了，怎么辦？

做液相色譜的同學基本都會碰到分叉峰

很多時候

這都意味著硬件或者方法某些地方可能出現問題

今天我們就一起看看導致峰分叉的原因

以及如何解決這個問題

首先，我們需要判斷

這到底是一個峰，還是兩個峰?

A圖主峰前面有一個肩峰

這到底是峰形不好

還是另外一個化合物沒分開呢?

降低該成分在樣品中的濃度
B圖是降低該成分濃度后

進樣后得到的色譜圖

如果這是一個峰

那肩峰也應該響應變小

但是這個例子里

肩峰沒有變小

這應該是另外一個化合物

這時候，我們就要考慮如何改變方法

將這兩個東西分開

如果所有峰的峰形都不好
一般來說

一個樣品都會出多個峰

峰形不好，絕大多數時候

在每個峰上面都會出現

比如像下面這樣:

A圖是所有峰都拖尾.
B圖是所有峰都有肩峰，

也可以說峰分叉
這種情況一般都是色譜柱頭塌陷

或者柱頭的篩板被堵導致的

請看下面的圖

A圖是正常的柱頭

B圖是篩板被堵的柱頭
正常情況下

所有樣品分子都是均勻通過色譜柱

形成一個對稱的峰形
堵塞的情況下

有一部分樣品分子進入色譜柱就會受到阻擾

導致時間拖后，形成拖尾
對于色譜柱塌陷的情況

用同樣的方法大家也不難理解

只不過這時候

是一些樣品分子可能跑的比正常的快了一些

柱出口放空，

沖20-30ml流動相。

雖然柱子上都有表明使用方向，

但是對于硅膠基質的色譜柱

基本都可以反沖。
將柱頭污染物

如泵密封圈的碎屑，

樣品中的污染等沖走，

就能解決問題。

當然，還是要提倡大家注意

樣品上機之前的前處理

和及時更換磨損的泵密封圈。

有條件的還是用保護柱，

大不了就換保護柱，

也比換色譜柱強。

現在估計做這個事情的人不多，

但是誰有廢柱子，

想練練也未嘗不可。

根據之前說的，

可能是柱頭堵了，

或者塌陷了。

但是進一步檢查，

發現另有原因。

方法用的150 mm 4.6 mm, 5 um C18 柱子，

78% 乙腈，1.5ml/min，等度方法，

進樣10ul，100%乙腈溶解的樣品。
一般來說，

雖然10ul的純乙腈不會引起峰形不好，

但是有時候樣品溶劑的極性跟流動相差異較大時，

的確會引起峰形的問題。

我們怎么辦呢？

降低溶劑乙腈的比例，

降到50%看看。

從下圖B，4min的峰可以看出，

沒啥改觀。

結果如圖C，

基本沒變化。

算了，明天再說吧。

還能干嘛呢?

更換篩板?

算了，直接換柱子吧！

結果如D，

噢，好很多噢。

之前柱子肯定有問題，扔了。

但是峰還是有點寬，

估計還是哪兒有問題。

手上忙，沒時間管這個。

重新配了流動相，

一跑，好了，如圖E。

雖然到底什么原因導致之前峰形的問題，

已經無從查找

（柱子扔了，舊流動相也沒了），

但是也給我們提供了一個解決問題的步驟：