液相色譜脫氣裝置

　　1. 為什么要脫氣
　　
　　流動相溶液往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成氣泡。氣泡進入檢測器后會在色譜圖上出現尖銳的噪音峰。小氣泡慢慢聚集后會變成大氣泡，大氣泡進入流路或色譜柱中會使流動相的流速變慢或出現流速不穩定，致使基線起伏。氣泡一旦進入色譜柱，排出這些氣泡則很費時間。在熒光檢測中，溶解氧還會使熒光淬滅。溶解氣體還可能引起某些樣品的氧化或使溶液pH值發生變化。

　　2. 脫氣方法
　　
　　目前，液相色譜流動相脫氣使用較多的是離線超聲波振蕩脫氣、在線惰性氣體鼓泡吹掃脫氣和在線真空脫氣。

　　超聲波振蕩脫氣： 將配制好的流動相連容器放入超聲水槽中脫氣10～20min。這種方法比較簡便，又基本上能滿足日常分析操作的要求，所以，目前仍廣泛采用。

　　惰性氣體鼓泡吹掃脫氣： 將氣源（鋼瓶）中的氣體（氦氣）緩慢而均勻地通入儲液罐中的流動相中，氦氣分子將其它氣體分子置換和頂替出去，而它本身在溶劑中的溶解度又很小，微量氦氣所形成的小氣泡對檢測無影響。

　　真空脫氣裝置： 將流動相通過一段由多孔性合成樹脂膜制造的輸液管，該輸液管外有真空容器，真空泵工作時，膜外側被減壓，分子量小的氧氣、氮氣、二氧化碳就會從膜內進入膜外而被脫除。圖8-5是單流路真空脫氣裝置的原理圖。一般的真空脫氣裝置有多條流路，可同時對多個溶液進行脫氣。

梯度洗脫裝置

　　1. 為什么要進行梯度洗脫？

　　在進行多成分的復雜樣品的分離時，經常會碰到前面的一些成分分離不完全，而后面的一些成分分離度太大，且出峰很晚和峰型較差。為了使保留值相差很大的多種成分在合理的時間內全部洗脫并達到相互分離，往往要用到梯度洗脫技術。

　　2. 梯度洗脫操作

　　在液相色譜中流速（壓力）梯度和溫度梯度效果不大，而且還會帶來一些不利影響，因此，液相色譜中通常所說的梯度洗脫是指流動相梯度，即在分離過程中改變流動相的組成或濃度。

　　　　
　　線性梯度： 在某一段時間內連續而均勻增加流動相強度。
　　
　　階梯梯度： 直接從某一低強度的流動相改變為另一較高強度的流動相。

　　梯度洗脫時，流動相的輸送就是要將幾種組成的溶液混合后送到分離系統，因此，梯度洗脫裝置就是解決溶液的混合問題，其主要部件除高壓泵外，還有混合器和梯度程序控制器。根據溶液混合的方式可以將梯度洗脫分為高壓梯度和低壓梯度。

　　高壓梯度： 一般只用于二元梯度，即用兩個高壓泵分別按設定的比例輸送A和B兩種溶液至混合器，混合器是在泵之后，即兩種溶液是在高壓狀態下進行混合的，其裝置結構如圖8-6所示。高壓梯度系統的主要優點是，只要通過梯度程序控制器控制每臺泵的輸出，就能獲得任意形式的梯度曲線，而且精度很高，易于實現自動化控制。其主要缺點是使用了兩臺高壓輸液泵，使儀器價格變得更昂貴，故障率也相對較高，而且只能實現二元梯度操作。

　　低壓梯度： 只需一個高壓泵，與等度洗脫輸液系統相比，就是在泵前安裝了一個比例閥，混合就在比例閥中完成。因為比例閥是在泵之前，所以是在常壓（低壓）下混合，在常壓下混合往往容易形成氣泡，所以低壓梯度通常配置在線脫氣裝置，圖8-7是四元梯度系統的結構示意圖。來自于四種溶液瓶的四根輸液管分別與真空脫氣裝置的四條流路相接，經脫氣后的四種溶液進入比例閥，混合后從一根輸出管進入泵體。多元梯度泵的流路可以部分空置。