實驗方法原理
4-α-D-葡聚糖葡萄糖水解酶,葡聚糖 1,4-α-葡糖苷酶
通過水解末端 1,4- 和 1,6 連接的 α-1,6-葡糖苷鍵釋放 β-D-葡萄糖。這個實驗與 α-葡糖苷酶類似,只是用糖原代替麥芽糖作為底物。一段時間以后(5 min)反應停止,葡萄糖被測出與己糖激酶/6-磷酸葡糖脫氫酶偶聯。
實驗材料 酶樣品
試劑、試劑盒 乙酸緩沖液糖原溶液Tris(羥甲基)氨基甲烷
儀器、耗材 分光光度計
實驗步驟
實驗所需「試劑」具體見「其他」
0.54 ml 0.1 mol/L 乙酸緩沖液,pH 4.0
0.25 ml 糖原溶液
0.01 ml 酶樣品
25℃ 培養 5 min,而后加入 0.2 ml 0.3 mol/L Tris 停止反應。同「α-淀粉測定實驗」提到的那樣,測量滿足 α-葡糖苷酶的葡萄糖量(對比沒有酶的空白對照)
注意事項
其他
試劑:
0.1 mol/L 乙酸緩沖液,pH4.0(5.7 ml 乙酸,100%,Mr=60,溶于 800 ml H2O,用 1 mol/L NaOH 調至 pH 4.0,補充至 1 L)
糖原溶液(牡蠣中提取的糖原 80 mg 溶于 10 ml 水中)
0.3 mol/L Tris(羥甲基)氨基甲烷(Mr=121.1;363 mg 溶于 10 ml)