淋病奈瑟菌簡稱淋球菌,是常見的性傳播疾病淋病的病原菌,主要通過性接觸直接侵襲感染泌尿生殖道,口咽部及肛門直腸的黏膜,人類是其唯一的天然宿主和傳染源。人類對淋球菌無自然免疫力,均易感,病后免疫力不強,不能防止再感染。
1 生物學特性
1.1 形態與染色 淋球菌呈腎形或咖啡豆形,菌體直徑0.6~0.8
μm。常成對排列,鄰近面扁平或稍凹陷,形似咖啡豆。在急性感染的機體內,其形態較典型,通常位于中性粒細胞內,而在慢性淋病時常位于細胞外。從患者體內新分離的菌株可有莢膜和菌毛,經人工培養后,呈卵圓形或球形,排列不規則。無鞭毛和芽孢。淋球菌革蘭染色陰性。用堿性美藍染色時,菌體呈藍色。用Pappehheim
Saathof染色時,菌體呈紅色,背景為天藍色。
1.2 結構
淋球菌外面結構為外膜,外膜的主要成分為膜蛋白、脂多糖和菌毛。膜蛋白可使淋球菌黏附于人體黏膜上,通過細胞吞噬作用進人細胞,在細胞內大量繁殖,導致細胞崩解,淋球菌擴散到黏膜下層引起感染。菌毛易黏附于子宮腔和口腔上皮細胞表面,有致病力及傳染性。
1.3 培養特性
淋球菌培養要求高,一般不易培養,需在培養基中加入血液、血清或多種氨基酸和無機鹽類物質。淋球菌最適PH為7.5,最適溫度為35-37℃。常用血液瓊脂、巧克力瓊脂、EPV瓊脂等培養基。初次分離培養在血瓊脂或巧克力瓊脂上5%-10%CO2條件下生長良好,經24-48h培養后,可見表面光滑、凸起、半透明、高亮度、直徑0.5-1.0mm的圓形菌落
1.4 生化反應 淋球菌可發酵葡萄糖、產酸,但不發酵麥芽糖、蔗糖和乳糖。氧化酶和觸酶試驗均陽性。
1.5 抵抗力
淋球菌有自溶現象,因其能產生自溶酶,易發生自溶造成死亡。淋球菌對外界理化因素的抵抗力較弱,對熱作用很敏感;不耐干燥,在完全干燥的環境中1~2
h即死亡,但若附著于衣褲和被褥中,則能生存18~24 h。淋球菌對消毒劑的抵抗力極差,1%苯酚溶液能在3
min內將其殺滅,1:4000硝酸銀溶液7 min可將其殺死,除耐藥菌株外,淋球菌對抗生素敏感,但抗生素的最小抑菌濃度逐漸有所提高。
2 致病機制
淋球菌對柱狀上皮細胞和移行上皮細胞有特別的親和力。男女性尿道和女性宮頸覆蓋有柱狀上皮和移行上皮,故易受淋球菌侵襲。淋球菌菌毛上的特異性受體可與黏膜細胞相應部位結合;其外膜蛋白Ⅱ可介導黏附過程;它還可產生IgAl蛋白酶,降解具有抑制其粘附于黏膜表面作用的IgA。這樣,淋球菌與上皮細胞迅速黏和,然后被吞噬到細胞內。一旦進入細胞,便開始繁殖,直至充滿整個細胞。淋球菌釋放內毒素,介導免疫反應從而引起上皮細胞受損。細胞溶解后釋放淋球菌至黏膜下間隙,引起黏膜下組織感染。淋球菌通過其內毒素脂多糖、補體和IgM等協同作用,形成炎癥反應,使黏膜紅腫。淋球菌感染后造成的炎癥可沿泌尿、生殖道蔓延播散,在男性可擴展至前列腺、精囊腺、輸精管和附睪,在女性可蔓延到子宮、輸卵管和盆腔。嚴重時淋球菌可進入血液循環系統,播散到身體其他部位。
3 微生物學和醫學分子生物學檢驗
3.1 標本采集 男性患者采用尿道口膿性分泌物及一次性拭子插入尿道內2-4cm處取分泌物;女性患者則以一次性拭子插入宮頸口0.5-1cm處取分泌物黏液。將上述取得的分泌物,首先輕輕涂布于載玻片上;然后取分泌物于無菌試管中,注意保濕保暖并及時送檢。
3.2 實驗室鑒定方法
3.2.1 直接涂片染色法
涂片直接革蘭染色后在顯微鏡下觀察,可見淋球菌呈革蘭染色陰性,菌體呈卵圓形或腎形,常成對排列,兩菌以平坦面相靠,形似一對咖啡豆。有時可見淋球菌位于中性粒細胞內。一旦發現形態典型的革蘭陰性雙球菌,報告為“找到革蘭陰性雙球菌咖啡豆形,成雙排列,分布于多形核細胞內外,形似淋球菌”。該方法檢出率較低,但特異性高且經濟實用、簡便易行。
3.2.2 細菌分離培養法
取分泌物直接連續劃線接種于血瓊脂或巧克力瓊脂平板上,置于含5%-10%CO2,35℃培養箱內培養24h后,觀察發現直徑0.5-1mm,呈圓形、光滑、濕潤、凸起、半透明或灰白色菌落。淋球菌具有氧化酶和觸酶,分解葡萄糖產酸,不分解蔗糖、麥芽糖和乳糖。細菌培養是檢驗診斷淋球菌感染的“金標準”,目前仍為診斷淋病最可靠的方法。但淋球菌對外環境抵抗力極弱,對冷、熱、干燥和化學消毒劑大都敏感;且臨床標本的采集、輸送、培養接種方式等都可能影響檢驗結果的準確性。
3.2.3 快速檢測法 采用淋病檢測試紙進行檢測,與比色卡陽性顏色相比,試紙變色一致則確認為陽性。
3.2.4 熒光定量PCR法 具體操作步驟嚴格按照PCR試劑盒說明書進行操作。最后結果判斷時在紫外線投射分析儀上觀察,與陽性對照區帶相同,清晰、規則、明亮、較窄的區帶判為陽性,否則為陰性。該方法是一種較為先進的分子生物學檢驗技術,借助于一種DNA擴增技術,能將含微量淋球菌的標本處理經2-3 h后擴增放大幾百萬倍,屬于一種基因診斷技術。它具有特異性強、靈敏度高、簡便、快速、對標本的純度要求低等優點。