作為現代科技飛速發展的產物，轉基因食品幾乎涉及國際食品貿易的各個方面，不僅使得各國對食品安全問題倍加關注，而且其引起的貿易爭端更是對世貿組織爭端解決機制的嚴峻挑戰。在我國，由于檢測技術和設備落后，國外大量轉基因產品在我們毫不知情的情況下涌入國內。如 2000 年我國進口大豆 1040 萬噸，其中大部分為轉基因大豆，對國產大豆生產造成巨大沖擊。
2001 年 5 月 23 日，國務院發布了新的第 304 號令《農業轉基因生物安全管理條例》，在該條例的第四章第二十八條明確規定了在中華人民共和國境內銷售列入農業轉基因生物目錄的農業轉基因生物，應當有明顯的標識。雖然我國已經公布了轉基因農產品標簽制度，但是實際檢測中仍然存在一定問題，如缺乏系統的、完整的、統一的轉基因農產品檢測和監控技術體系等。這些都在一定程度上影響了我國轉基因標簽制度的實施。建立規范、準確、快速的轉基因成分檢測技術，是加入 WTO 后在進出口貿易中維護國家利益的重要保障。
盡管在不同樣品（原材料、食品成分、加工產品）中， DNA 是一個相對穩定的分子，但是對于深加工產品來說， DNA 提取技術仍然是基于 DNA 擴增的轉基因檢測技術的瓶頸。本文關于轉基因檢測試驗的主要內容包括：利用試劑盒對轉基因植物及其深加工（大豆油、醬油、腐乳及玉米淀粉）的 DNA 提取方法，轉基因成分（主要針對 Monsanto 公司抗除草劑大豆 Roundup Ready Soybean 的 35s 、 Nos 、 EPSES 及 Lectin ）的 PCR 檢測等。
材料和試劑
1 材料
Monsanto 公司轉基因抗草甘膦大豆（ Roundup Ready Soybean ）與對照非轉基因大豆；市售福臨門牌大豆色拉油；市售和田寬牌黃豆釀造醬油；市售廣中皇老牌腐乳皇；市售長林牌玉米淀粉。
2 試劑
植物基因組 DNA 提取試劑盒、大豆油 DNA 提取試劑盒、醬油 DNA 提取試劑盒、腐乳 DNA 提取試劑盒、淀粉 DNA 提取試劑盒，由中國農業科學院生物技術研究所提供。 Taq DNA 聚合酶及其緩沖液購自申能博采公司， dNTPs 購自六合通公司。
PCR引物
引物由上海生工生物有限公司合成，其核苷酸序列和片段長度見表 1 。
表 1 Monsanto 公司轉基因抗草甘膦大豆 35s- EPSES 、 Nos 基因及大豆內標基因的引物及目標片段
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基因 |
引物 |
片段大小 |
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35s- EPSES |
5’-TGGCGCCCATGGCCTGCATG-3’ 5’-CCTTCGCAAGACCCTTCCTCTATA-3’ |
目標片段 為 509bp |
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EPSES -Nos |
5’-GCGAAGATCGAACTCTCCG-3’ 5’-TGATAATCATCGCAAGACCGG-3’ |
目標片段 為 147bp |
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Lectin |
5’-GCCCTCTACTCCACCCCCATCC-3’ 5’-GCCCATCTGCAAGCCTTTTTGTG-3’ |
目標片段 為 118bp |
二． DNA提取方法
植物樣品 DNA提取操作程序
取適量的樣品放在研缽中，加入液氮將樣品研磨成粉末，稱取約 70mg-100mg 磨碎樣品轉入 1.5ml 的離心管中；
加入 1ml Extraction Buffer Ⅰ，輕輕混勻；
室溫下 12,000rpm 離心 5 分鐘；
去掉上清，加入 500μl Buffer Ⅱ和 Buffer Ⅲ重新懸浮，混勻；
65 ℃水浴保溫 15 分鐘；
12,000rpm 離心 10 分鐘，吸取上清到另一新的離心管中；
加入 2 倍體積無水乙醇；混勻， 4 ℃放置 10 分鐘后， 12,000rpm 離心 10 分鐘，去上清，保留沉淀；
在沉淀中加入 100 μl Elution Buffer, 于 37 ℃充分溶解沉淀， 5 分鐘后加 300 μl Buffer Ⅳ，上下顛倒 10 次，充分混勻；
離心柱放置在一個 2ml 的套管上，將溶液加入到離心柱中，放置 2 分鐘；
10) 離心柱和 2ml 套管一起用 8,000rpm 離心 30 秒，棄去 2ml 套管中的溶液，在離心柱中加入 200 μl Wash Buffer Ⅰ ,8,000rpm 離心 30 秒，棄溶液；
11) 在離心柱中加入 200 μl Wash Buffer Ⅰ ,8,000rpm 離心 30 秒，棄溶液；
12) 在離心柱中加入 200 μl Wash Buffer Ⅱ ,8,000rpm 離心 30 秒，棄溶液；
13) 在離心柱中加入 200 μl Wash Buffer Ⅱ ,8,000rpm 離心 30 秒，棄溶液；
14) 12,000rpm 離心 30 秒，去除離心柱中痕量殘余溶液；
15) 將離心柱放置在一個新的 1.5ml 離心管中（離心管請自備），在離心柱底部中央小心加入 50 μl Elution Buffer, 于 Buffer ， 37 ℃放置 2 分鐘后， 12,000rpm 離心 30 秒；若需提高得率，可在在離心柱底部中央小心加入 50 μl Elution Buffer, 于 Buffer ， 37 ℃放置 2 分鐘后， 12,000rpm 離心 30 秒；
16) 離心管中的溶液即可作為 PCR 反應的摸板。建議一個 PCR 反應使用 0.5 μl DNA, 其余樣品在 -20 ℃保存備用。