用滲透溶脹法從HeLa細胞懸浮培養物中制備細胞核
| 實驗材料 | HeLa 細胞 |
|---|---|
| 試劑、試劑盒 | Earle’s 平衡鹽溶液 RSB |
| 儀器、耗材 | 玻璃蓋玻片 |
| 實驗步驟 | 1. 懸浮培養出 HeLa 細胞，600 g 離心 5 分鐘收集細胞。 2. 沉淀細胞用 5 倍體積 4℃ 預冷的 Earle’s 平衡鹽溶液重新懸浮。 3. 重懸浮的細胞在 4℃，600 g 離心 5 分鐘，或者如步驟 1 所說加以延長。 4. 用 10 倍體積的 RSB 重懸浮洗過的細胞沉淀，使離心管在冰上放置 10 分鐘。 RSB： 0.1 mol/L NaCl 1.5 mmol/L MgCl2 0.01 mol/L Tris-HCl ( pH 7.4) 5. 將一巴斯德吸管頭伸入細胞懸液 0.5~0.75 cm，通過虹吸作用取少量細胞涂到一載玻片上。 6. 其上覆蓋一塊 22 mm2 的玻璃蓋玻片，在相差顯微鏡下檢查細胞。 7. 將膨脹的細胞吸到預冷的玻璃 Dounce 勻漿器中。 8. 快速向上抽出研杵 10~12 次，破碎細胞。 9. 取少量細胞懸液在相差顯微鏡下觀察（具體步驟與第 6 步相同）。 10. 細胞懸液的勻漿產物中游離細胞核與完整細胞的比例達到或超過 9.0 后，將懸液在 4℃，1000 g 離心 3 分鐘以沉淀細胞核。 11. 用一裝有橡膠吸球的巴斯德吸管吸去上清，再用一干凈的巴斯德吸管將細胞核沉淀重新懸浮于 10 倍體積的 RSB 中。 12. 按照第 10 步的方法離心細胞核，再用 10 倍體積的 RSR 重懸浮。 13. 重復第 12 步。 |