牛奶體細胞數有哪些檢測方法？

牛奶體細胞數量是衡量奶牛生理健康狀況的重要指標,高體細胞數直接指證奶牛的乳腺患有炎癥性疾病。患炎癥奶牛所產的牛乳不僅營養成分含量偏低,而且人們誤飲后甚至會引發群體性食物中毒,直接威脅飲用者的安全和健康。對牛乳體細胞數進行檢測,可以及時發現有炎癥的奶牛,進而從源頭上保障牛乳的品質。介紹了關于牛乳體細胞數的主要檢測方法,并對這些方法的特點進行了分類匯總,進而對這些方法的發展和應用進行了總結和展望。牛奶體細胞數有哪些檢測方法？下面具體來介紹一下：

1、牛奶體細胞的來源及正常指標

奶牛乳腺正常時，分泌鮮乳內的體細胞主要為巨噬細胞，但當乳腺發生炎癥時，分泌鮮乳內的體細胞主要為白細胞，是一種免疫細胞，是由于機體與病原相互斗爭產生的物質。當奶牛乳腺組織發生感染后，90%以上都為嗜中性粒細胞。在細菌侵入到乳腺組織并開始大量繁殖時，就會導致多核白細胞等免疫細胞逐漸接近感染部位，并侵入乳腺泡將病原微生物吞噬。另外，發生炎癥反應時，巨噬細胞會大量增殖，并產生一些化學介質，促使炎癥反應進一步加重，造成組織毛細血管的通透性明顯增強，促使血漿白蛋白、免疫球蛋白以及其他多種白細胞侵入乳腺泡腔內，形成白細胞用于吞噬細菌。

牛奶體細胞數(SCC)主要用于判斷奶牛乳腺健康與否。例如，當牛乳中SCC有所增加，但乳房組織沒有出現明顯癥狀，即可判斷患有亞臨床型乳房炎。另外，牛乳中的SCC還能夠用來表明發生炎癥反應的輕重程度。通常來說，奶牛沒有發生乳房炎分娩的乳汁中，每毫升的牛乳SCC在20萬個以下，而如果發生臨床型乳房炎或者亞臨床型乳房炎時，每毫升牛乳SCC可超過50萬個。

2、常用檢測方法

1）顯微鏡細胞計數法。人工顯微鏡計數法是一種直接檢測法，是指鮮牛乳樣品直接滴加在載玻片上使用顯微鏡觀察，并由人工計算所含的體細胞。鮮牛乳采取該法檢測體細胞的步驟是：先配置染色液，即取40　mL四氯乙烷和54　mL乙醇，充分搖晃均勻，然后放在65℃的溫水溶液中進行3　min加熱，再添加0.6　g甲基蘭，混合均勻后置于4℃冰箱，在溫度達到4℃時再添加6　mL冰醋酸，放在常溫條件下保存；取一片干凈的載玻片，劃分成4個小方格，每格面積為1　cm2，然后用微量注射器吸取10　μL生鮮牛乳樣品注射到1　cm2的載玻片上，平放在恒溫箱中，干燥后浸在染色液，后形成均勻玻片；放在300～500倍顯微鏡下對玻片上的染色細胞進行觀察，按照一定的準則計算體細胞數量。一般按照“數上不數下，數左不數右”的計數規則進行計數，防止出現遺漏和重復。盡管該法使用設備簡單，容易在實驗室外操作，但整個操作過于繁瑣，具有較大的工作量，特別是在計數時容易出錯。在人工顯微鏡計數法的基礎上，通過改進發明熒光顯微鏡計數法，即使用特殊的緩沖液或染液對鮮牛乳樣品進行處理，再使用安裝相應濾色鏡的熒光顯微鏡進行計數。一般來說，鮮牛乳中的蛋白質不會形成熒光，不會影響測定，脂肪球會形成黃綠色的熒光，使用相應的濾色鏡能夠擋住，只有體細胞形成的紅色熒光能夠看見，從而能夠更好地使熒光細胞同周圍背景進行區別，能夠有效提高計數的準確率。

2）加利福尼亞細胞數測定法（CMT法），是一種間接檢測法，其原理是鮮牛乳中的體細胞接觸表面活性試劑，如溴甲酚紅紫、烷基芒硫酸鹽、烷基芳基磺酸或者氫氧化鈉等，能夠使細胞收縮凝固，同時釋放脫氧核糖核酸，并發生凝聚，含有越多的體細胞，凝聚狀態則會越強，形成越多的凝聚塊，對這些凝聚塊統計就能夠估算體細胞的數量。該法所需設備少，操作簡單，檢測速度快，靈敏度高，價格便宜，結果比較準確，且同直接鏡檢細胞計數法、過氧化氫酶活性等也具有較好的關聯性，且受環境溫度影響較小，樣品中即使混雜有毛發等外源物質也不會對結果產生影響，適合對個體奶牛或者總奶樣進行檢驗；缺點是只能夠得到體細胞的相對數量，比較容易受到人為因素影響，必須經過專門培訓的人員才能夠進行該項檢查。另外，該法有時會出現假陽性結果，如鮮牛乳不新鮮或者泌乳末期的乳汁等，建議是檢測泌乳量中期的牛乳。牛乳感染細菌后能夠產生的毒素，導致體細胞被破壞，會使臨床乳腺炎陽性的牛乳呈陰性。

3）pH值檢測法。該法是一種間接檢測法，由于奶牛乳房發炎后所分泌的乳汁pH值同體細胞間存在一定的關聯性，從而可經由測定牛乳樣品的pH值來判斷所含體細胞的數量。檢測時，先用一次性培養皿取2　mL左右的鮮牛乳樣品，并滴加相同劑量的診斷液，按照同心圓方式對培養皿進行搖動，在30～60　s之間就能夠判斷結果。當測地的牛乳pH值處于6.　4～6.6之間，判斷每毫升的牛乳中含有0～20萬個體細胞；pH值處于6.6～6.8之間，判斷每毫升含有20萬～50萬個體細胞；pH值位于6.8～7.0之間，判斷每毫升含有50萬～150萬個體細胞；pH值位于7．O～7.2之間，判斷每毫升含有150萬～500萬個體細胞；pH值超過7.2，判斷每毫升含有500萬個以上的體細胞。該法操作簡單，但是檢測結果有時不太準確，還需要配合進行顯微鏡檢測才能獲得比較準確的結論。

檢測牛奶體細胞數有哪些方法？
前獲得世界各國普遍承認和使用的體細胞計數方法概括起來主要分為顯微鏡人工計數法和自動計數儀計數法。
1、顯微人工計數：體細胞計數的標準方法為顯微鏡鏡檢法，此法準確，大部分的快速檢測方法均用此法作校準，但在制備樣品、計數鏡檢時費時、費力，不適合作為現場快速和大樣品量時使用。

2、自動計數儀計數：目前，在乳品生產中牛乳體細胞計數主要是依靠大型的體細胞儀完成的，體細胞自動計數分析研究主要有以下兩個方面:
（1）流式細胞分析法.具代表性的產品為美國BentlySomaCount計數儀。基于激光流式血細胞計數的方法來測定原奶中的體細胞數量,該法檢測速度快，適合乳品集中檢測，操作簡便計數準確，耗材成本低。
（2）另一方面是利用數字圖像分析系統，該方法是基于標準鏡檢法的一種方法，華誠睿光的牛博士Ⅱ和牛博士Ⅲ就是這種檢測方法的典型代表。機器設備成本低但是耗材成本高。