牛血清在細胞培養基中的實驗步驟（一）

牛血清在細胞培養基中的實驗步驟 

1. 取HeLa細胞和Mel細胞（本來應該取正常的二倍體細胞和不太好養的腫瘤細胞，但是實驗室條件有限，本組做HeLa細胞），胰酶消化后，用無血清培養基（事先加雙抗）吹打成細胞懸液（避免以前血清的干擾）。計數。

2.取4000個左右的HeLa細胞加入到每行的孔（在加之前要震蕩培養基）。本實驗經計數后應加11μL細胞。

3.在A和H行中孔加入89μL含標準血清（2004.12）的培養基。（對照組）

4.在A和H行中每一孔中加入100μL含標準血清的培養基。

5.將孔中的液體吸100μL至第二孔，從第二孔吸100μL至第三孔，然后相同。*后的100μL棄掉。這樣就形成了從個孔到*后一個孔的細胞梯度從大約2056，1028等至1個。（要吹細均勻）

6.每個孔再補加100μL含標準血清的培養基。這可以保證孔中的營養物質。

7.在B行采取同樣的方法。白介素ELISA試劑盒不同的是用含有需篩選的批號為011217血清代替標準血清。

8.在C至G行采用同樣的方法。

9.將96孔培養板放入CO2 培養箱37℃培養一周。

10. 培養結束后，觀察細胞生長的情況。比較在同一細胞濃度下的不同學清對細胞生長的影響。在同一細胞濃度下細胞生長數*多的培養基所含有的血清即可作為被選擇的血清樣品。

牛血清的主要成份

血清是一種很復雜的混合物，其組成成份雖大部分已為人所知，但還有一部分尚不清楚，而且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而異。

1. 蛋白質是牛血清中主要成份。除包括可攜帶金屬離子、脂肪酸和自身是激素類蛋白外主要還有白蛋白，球蛋白。

纖維粘連素 細胞促進細胞附著；

α2 巨球蛋白 抑制胰蛋白酶的作用；胎牛血清中含胎球蛋白 促細胞附著；轉鐵蛋白 能結合鐵離子，減少其毒性和被細胞利用。

2.多肽：血小板促生長因子能促細胞分裂，是多肽家庭的主要成員，是主要的促細胞增殖因子；成纖維細胞生長因子、表皮細胞生長因子、神經細胞生長因子等，血清中含量雖很少，但對細胞生長也有一定作用。

3.激素：激素對細胞的作用是多方面的。

胰島素：促進細胞攝取葡萄糖和氨基酸，與促細胞分裂有關。

類胰島素生長因子：能與細胞表達的胰島素受體結合，從而有胰島素同樣的作用。

促生長激素：促細胞增殖效應。

：血清中含有定量的該成分，它可能兼有促細胞貼附和增殖作用，但有人證明，血清中的

，如細胞密度高時可能有抑制細胞的作用和誘導其發生分化。

4其他成份

氨基酸、葡萄糖、酮酸等對多種營養成分的合成培養基意義不大。與蛋白相結合狀態的微量元素對細胞培養有意義。