獨立研究證實V3western流程的優越性

　　來自澳大利亞弗林德斯大學(Flinders University)的研究人員近日在《Analytical Biochemistry》雜志上發表獨立研究成果，證實了在western blotting中采用Bio-Rad stain-free技術的優越性。

　　弗林德斯大學的Alex Colella博士及其同事在文章中介紹了stain-free(無染色)方法讓他們可評估電泳和western轉移的質量，之后再開展western blotting的后續步驟，這樣能夠在更短的時間和更少的步驟內獲得更準確的blot數據。

　　為了確保半定量western blotting的準確性，最重要的步驟之一是確定每塊凝膠的蛋白上樣量。蛋白估算不精確、移液不準確，或蛋白轉移不均勻，都可導致上樣誤差。一般來說，研究人員依靠兩種上樣對照：用看家蛋白(β-actin)的抗體重新標記，或使用總蛋白染料，如SYPRO Ruby、麗春紅或考馬斯藍。

　　在使用看家蛋白作為上樣對照時，必須確定實驗變量改變時，這個蛋白的表達水平不變。在某些情況下，與待測蛋白相比，看家蛋白的表達量有可能過高或過低;有時，在比較不同組織提取物中的特定蛋白豐度時，這些對照甚至不可用。

　　Stain-Free技術可實現蛋白分離和轉移效果的實時觀察。將跑完的預制膠或轉印好的PVDF/NC膜放入ChemiDoc? MP成像儀中，只需1分鐘，即可對蛋白分離和轉印情況了如指掌。他們的研究結果表明，stain-free方法是現有方法的出色替代，因為電泳和 western轉移的質量可在抗體檢測之前證實。發現每一步中的問題有利于研究人員開展troubleshooting。同時，研究人員有更多的時間來優化他們的流程，因為stain-free方法將整個流程從2天縮短至1天。

　　Chataway博士提到stain-free凝膠和SYPRO Ruby染色的表現相當，但stain-free凝膠的使用讓半定量western blotting的時間縮短了1.5小時。同時，由于避免了昂貴試劑的使用，stain-free方法也降低了總成本。

　　弗林德斯大學醫學院蛋白質組實驗室的主管Tim Chataway認為：“我們的研究表明，Bio-Rad的stain-free凝膠可改善半定量western blotting實驗的數據質量。”而Chataway博士也表示：“我們發現stain-free技術是傳統方法的更快更經濟高效替代，比對照上樣這種方法更為出色。”