人類ABO 血型鑒定試驗(玻片法)
1.原理
人類ABO血型抗原有A和B兩種。A型紅細胞膜上有A抗原,B型紅細胞上有B抗原,AB型有A和B兩種抗原,而O型則不含有A和B抗原。據此,如分別將抗A和抗B血清與待測紅細胞混合,抗A和/或抗B血清與紅細胞表面上的相應抗原結合而引起紅細胞凝集,根據其凝集狀況便可判定受試者的血型(見表5-1)。
表5-1血型鑒定試驗結果與判定
2.方法
(1)用酒精棉球消毒無名指指端皮膚或耳垂,待酒精干后用無菌采血針刺破表皮,用毛細吸管取血1~2滴,放入含1m1 生理鹽水的小試管中,混勻,即成待檢紅細胞懸液(約2%)。取血后,應立即用無菌干棉球壓迫針眼止血。
(2)取凹玻片或載玻片一張,用記號筆分為兩格,并注明A、B字樣。
(3)用巴氏吸管吸取抗A血清、抗B血清各一滴分別滴于A、B格內(也可用2ml的一次性注射器代替巴氏吸管)。
(4)另用巴氏吸管取待測5%紅細胞懸液,于A格和B格內各加一滴。然后分別用牙簽將抗血清與紅細胞攪拌均勻(也可輕輕晃動載玻片以促其充分混勻),以加速其反應。將玻片放置于實驗臺上靜置數分鐘后,在白色背景下觀察凝集情況。
3.結果觀察與判定
如混合液由均勻紅色混濁狀逐漸變為澄清,并出現大小不等的紅色凝集塊者即為紅細胞凝集;若混合液仍呈均勻混濁狀,則表明紅細胞未發生凝集。
如肉眼觀察不夠清楚,可將玻片置于顯微鏡下用低倍鏡觀察。
不凝集(-)凝集(+)
4.注意事項
(1)試驗用凹玻片或載玻片要清潔,注明A 和B 字佯。
(2)所用抗A、抗B血清必須在有效期內(注意試劑包裝說明的有效期限)使用。
(3)待檢紅細胞懸液不宜過稀或過濃。
(4)要及時觀察結果,以防時間過長使標本干涸而影響結果觀察和判定。
三、試管凝集反應
1.原理
試管凝集反應是一種定量試驗,常用已知顆粒性抗原來檢測未知抗體及其含量。方法是用生理鹽水將待測血清在試管中進行連續倍比稀釋,然后于各管中加入等量已知抗原懸液,37℃過夜或56℃水浴2小時后,觀察有無凝集并根據凝集程度,判定待檢血清抗體的效價。
本法主要用于某些傳染病的輔助診斷及流行病學調查,如傷寒、副傷寒及布氏桿菌病的診斷等。
2.方法
(1)取潔凈小試管8只并依次排列于試管架上,用特種鉛筆或記號筆按順序注明號碼。
(2)將1ml刻度吸管套上乳膠皮頭,吸取生理鹽水0.9ml 加至1號試管,余下每管中分別加入0.5ml 生理鹽水。
(3)用1ml刻度吸管取0.1ml抗傷寒桿菌“H”血清于第1管中。
(4)用1ml吸管在1號管內連續吸吹三次,使血清與生理鹽水充分混勻,然后吸取0.5ml加至2號試管,隨后按上法進行倍比稀釋直至7號試管,最后從7號管中吸出0.5ml混合液棄去。至此,1~7號試管的血清稀釋度依次為1:10,1:20,1:40,1:80,1:160,1:320,1:640,而8號管中只有0.5ml生理鹽水,此管系陰性對照管(見圖5-1)。
(5)取5ml吸管吸取傷寒桿菌H菌液,加于1~8號試管中,各加0.5ml。此時,每支試管中的液體量均為1ml,1~7號試管的血清最終稀釋度分別為1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640、1:1280。
(6)持試管架輕輕振蕩搖勻,以使血清與菌液混合均勻。然后置37℃恒溫箱過夜或56℃水浴箱2h,再觀察結果。