染料組成：
酸性染料伊紅（E-） 鈉鹽 陰離子
堿性染料亞甲藍（M＋） 氯鹽 陽離子
將適量伊紅、亞甲藍溶解在甲醇中。
甲醇的作用：一是溶解亞甲藍和伊紅；二是固定細胞形態。
2. 染色原理 物理吸附與化學親和作用
③中性顆粒 呈等電狀態與E-和M+結合→淡紫紅色
④紅細胞
原始紅細胞、早幼紅細胞胞質、核仁，染成較濃厚的藍色；中幼紅細胞既含酸性物質，又含堿性物質，染成紅藍色或灰紅色；完全成熟紅細胞，酸性物質徹底消失后，染成粉紅色。
3. pH值的影響
細胞各種成分均屬蛋白質，由于蛋白質系兩性電解質，所帶電荷隨溶液pH而定，在偏酸性環境中正電荷增多，易與伊紅結合，紅細胞和嗜酸性粒細胞染色偏紅，細胞核呈淡藍色或不染色；在偏堿性環境中負電荷增多，易與美藍結合，所有細胞呈灰藍色，顆粒呈深暗，嗜酸性顆粒呈暗褐，甚至棕黑色，中性顆粒偏粗，呈紫黑色。
①pH＜pI→Pr帶正電荷多→易與E-結合→染色偏紅
②pH＞pI→Pr帶負電荷多→易與M+結合→染色偏藍
磷酸鹽緩沖液（pH6.4～6.8）
保證細胞受色時恒定最佳pH條件
4. 注意事項
（1）血涂片干透后固定，否則細胞在染色過程中容易脫落。
（2）沖洗時應以流水沖洗，不能先倒掉染液，以防染料沉著在血涂片上。沖洗時間不能過久，以防脫色。如血涂片上有染料顆粒沉積，可滴加甲醇，然后立即用流水沖洗。
（3）染色過淡可以復染，復染時應先加緩沖液，然后加染液。染色過深可用流水沖洗或浸泡，也可用甲醇脫色。