生物親和素ELISA知識

生物素親和素 (又稱抗生物素) 系統 (biotinavidinsystem,BAS) 標記抗體的技術是 20 世紀 70 年代后期發展起來的一種新的免疫檢測方法。由于親和素與生物素間的親和力極強，結合迅速，且極其穩定，生物素標記抗體和酶的標記率高，又不影響蛋白的活性，使 BAS 標記技術比常規酶聯免疫、放射免疫及熒光免疫技術有著更高的靈敏度，為微量抗原、抗體的檢測開辟了新的途徑。

目前生物素和親和素 (近年來，在 BAS 檢測中多用鏈霉親和素「streptavidin,SA」，它是鏈霉菌培養過程中的分泌物，完整的鏈霉親和素和從卵白中提取的親和素一樣，也由 4 條相同的肽鏈組成。因鏈霉親和素在檢測應用中發生的非特異性結合遠較親和素低，因此日漸受重視，已有取代親和素之勢。各種抗體或酶的標記物在國內已有商品供應，使用方便。

BAS ELISA 具有的特點：

①對于所有的抗原抗體系統，包括免疫細胞化學、ELISA、免疫印跡法等都適用，應用范圍極廣；

②BAS 在溫和條件下可與各類生物大分子如蛋白質、脂多糖等結合，并且這種結合對原生物大分子的生物活性無影響；

③每個親和素分子可與 4 個生物素分子結合，所以可以偶合更多連接生物素的酶分子，從而大大提高了靈敏度；

④生物素和親和素間親和力強，故二者一旦結合，就極為穩定，不受在 ELISA 方法中的保溫及多次洗滌影響，而且這種結合反應時間比抗原抗體反應所需時間短；

⑤結果專一性強，非特異性顯色或染色背景極低；

⑥第一抗體稀釋度高，可節約抗體。

原理：

生物素或親和素與抗體分子或標記物結合后，既不影響前者的親和力，也不改變后者的特性。親和素分子的 4 個活性部位并非都和連接在抗體分子上的生物素殘基結合，剩下的游離部位尚可作為另一種生物素標記蛋白質的受體。這些特點就是 BAS 免疫標記技術的基礎和原理。

BAS 基本檢測方法可分為兩大類：一類以游離親和素居中，分別連接生物素化大分子反應體系和標記生物素，稱為 BAB 法或橋聯親和素生物素法 (bridged avidinbiotintechnique,BRAB)，其改良法稱為 (avidinbiotincomplex,ABC) 法。另一類以標記親和素連接生物素化大分子反應體系，稱為 BA 法或標記親和素和生物素法 (LAB)。

現分別介紹如下：

1. BA 法亦稱 LBA 法。系將特異性抗體生物素化，將酶分子標記在親和素分子上，生物素化抗體與被檢抗原結合后，再借 BAS 的高度親和力將酶分子聯結到抗原分子上，經酶促反應即可檢出抗原。
   

2.BAB 法亦稱 BRAB 法。系將特異性抗體生物素化，將酶分子標在生物素上，然后以游離親和素橋聯物，使被檢抗原、生物素化抗體和酶標生物素聯成一體。

3.ABC 法原理與 BAB 法基本相同，只是親和素和酶標生物素需要先按一定比例形成 ABC 復合物，這種網絡結構結合了大量的酶分子，當親和素尚未被酶標生物素飽和時，生物素化抗體即可與之結合。BASELISA 的三種基本檢測法。

上述方法中，如將第二抗體生物素化，即為間接法。由于間接法增加了一級抗原抗體反應，因而比直接法更敏感，應用范圍更廣。近年來許多學者對上述基本方法進行了改良，有人用親和素抗體或 A 蛋白作橋聯物。另外還發展了 BAELISA 競爭法和抑制法等。