由于大部分蛋白質都能溶于水、稀鹽、稀酸或稀堿溶液,所以蛋白質的提取一般是以水溶液為主,其中鹽溶液和緩沖溶液對蛋白質的穩定性好、溶解度大,是提取蛋白質最常用的溶劑。當細胞粉碎后,用鹽溶液或緩沖溶液提取蛋白質時,應注意以下一些條件。
(1)鹽濃度
常用等滲鹽溶液,尤其以0.02～0.05mol/L磷酸緩沖溶液和碳酸緩沖落液、0.15mol/L氯化鈉溶液應用較多。但有些蛋白質在低鹽濃度下溶解度較低,需用濃度較高的鹽溶液,如脫氧核糖核蛋白需用1mol/L以上的氯化鈉溶液提取;而另一些蛋白質則在低鹽濃度溶液或水中溶解度較高,如某些霉菌中的脂肪酶用水提取效果更好。因此,在用水溶液提取蛋白質時,需根據所要提取的蛋白質來選擇不同種類和不同濃度的鹽溶液。
(2)pH值
由于蛋白質的溶解度和穩定性與pH值關系很大,因此pH值的選擇對蛋白質的提取十分重要。提取蛋白質時,提取溶液的pH值應選定在該蛋白質的穩定范圍,在該蛋白質等電點的兩側,提取堿性蛋白質時要選在偏酸一側,提取酸性蛋白質時要選在偏堿一側,以增大蛋白質的溶解度,提高提取的效率。
3.RNA的提取
用0.14mol/L氯化鈉溶液將組織作勻漿并反復提取細胞質中的核蛋白,而留下含有DNA的細胞核物質,然后用10%乙酸調至pH4.2沉淀,離心棄去上清液,先用0.5mol/L氯化鈉溶液沉淀后用水洗滌沉淀,得核糖核蛋白后溶解于0.5mol/L碳酸氫鈉溶液中,離心,取上清液,調至pH4.2沉淀,以0.5mol/L氯化鈉溶液再一次除脫氧核糖核蛋白。核糖核蛋白中的蛋白質可用含少量辛醇的氯仿抽提除去,核酸留在碳酸氫鈉溶液中,加入乙醇,RNA以鈉鹽形式沉淀出來。
破碎細胞做成勻漿時,加入去污劑十二烷基磺酸鈉或二甲苯磺酸鈉,加入含水苯酚,與勻漿一起振蕩,DNA與蛋白質沉淀于苯酚層,水層中含有RNA和多糖,然后用乙醇使RNA沉淀。苯酚法是目前提取不降解的RNA最有效的方法。