質譜分析
Synapt HDMS和Synapt G2 HDMS
該質譜儀在正離子MSE模式下運行。所用的毛細管電壓為3.0kV，源溫度和去溶劑化溫度分別被設定為120℃和400℃。
在MSE采集模式下，儀器交替在低、高碰撞能量狀態下進行交替掃描。這樣可在一次分析內同時收集所有分析物的母離子和碎片離子的信息，消除了諸如DDA等其它常規方法所帶來的采樣偏差；在常規方法中，特定的m/z必須在碎片化前被分離出來。
Xevo-TQ質譜
Xevo TQ可同時在正離子和負離子模式下運行。毛細管電壓為3.0kV，源溫度和去溶劑化溫度分別被設定為150℃和650℃。去溶劑化氣體流速被設定為1200L／小時，碰撞氣體（氬）的流速為0.18mL／分鐘（4×10-3毫巴）。MS1/MS2分辨率被設置為單位質量（0.75Da FWHM）。
組織提取物的樣品制備
紅色的比目魚肌（S）用來與白色的腓腸肌（G）進行比較，肌肉從禁食一整夜的BALB/c小鼠中切下并進行了急速冷凍。代謝物通過組織均質化的方法在1:1的甲醇：水混合溶劑中進行萃取，脂質通過將氯仿以1:1的比例添加至甲醇／水萃取液中而得到去除。去脂質后的組織萃取樣本分別用400μL和4000μL的90:10乙腈：水混合溶劑進行揮干復溶。由于某些組分的含量高于定量上限，因此也對每份樣本再稀釋10倍進行了分析。
結果和討論
1. 通過聯用Synapt HDMS的UPLC進行HILIC LC-MS方法開發
圖1. 108種標準強極性細胞代謝物的總離子色譜圖，其中包括氨基酸、DNA/RNA堿基及其磷酸鹽、輔酶A、B族維生素、有機酸等。
圖1給出了108種標準強極性細胞代謝物的總離子色譜圖（TIC），其中包括氨基酸、DNA/RNA堿基及其磷酸鹽、輔酶A、B族維生素、有機酸等。此項試驗通過聯用沃特世Synapt HDMS（正離子MSE模式下）的沃特世UPLC【液相色譜條件（1）】而進行。
圖2. 單一化合物提取離子色譜圖示例（50mDa窗口內）
圖2給出了關于單一化合物提取離子色譜圖片段（50mDa窗口）的一些例子。所選取的提取離子色譜圖中的大部分峰寬測定值介于5-15秒之間。然而，也觀察到了拖尾峰，其峰寬長達60秒。因此，我們考慮修改液相色譜的條件。