用于激酶分析的細胞裂解實驗

培養細胞（貼壁貼壁細胞在100 mm 組織培養板中約 70% 生長成片／懸浮細胞濃度 為 10^6 細胞／ml）

PBS 裂解緩沖液 蛋白酶抑制劑儲存液

微量離心機

1. 用預冷的 PBS 洗細胞 2 次，將最后的洗液盡可能吸盡。

2. 加入 0.75 ml 裂解緩沖液重懸 2 × 10⁷ 個細胞，若是貼壁細胞必須完全覆蓋。加入蛋白酶抑制劑儲存液，使其終濃度為 1 mmol/L PMSF，100 μmol/L 苯甲脒，5 μg/ml 亮抑蛋白酶肽，5 μg/ml抑胃酶肽 A，5 μg/ml抗蛋白酶。

3. 4°C 冰浴細胞 10 min，刮離細胞并將裂解液移至標記的微量離心管中。

4. 4°C，最大速度離心 10 min，小心地將上清移至新微量離心管中，迅速進行后續實驗。

若用于免疫沉淀（先使用 25%～50% 的裂解物進行初試驗，再依據結果進行裂解物量的調整）和簡單純化，0.75 μl 的裂解物就足夠了。如果純化過程需經超過一次以上的層析步驟。可適當擴大裂解液的量，因為每一層析步驟僅能回收 10%～20% 的激酶活性。