Offenbach市的BAV研究所23個月共檢測28000多份食品樣本。他們使用了自動制備樣本的設備，并采用實時定量PCR技術。以至于能更快的完成食品樣本的檢測，也大大減少了出錯率。
圖1.(按照ISO 6579標準)用分子生物學和微生物學分別對沙門氏菌進行檢測方法比較。
實時定量PCR(聚合酶鏈式反應)技術是一種檢測沙門氏菌的快速、可靠的方法。與傳統的經典方法不同，使用分子生物學技術后此法能夠明顯縮短沙門氏菌的檢測時間。可以說，實時定量PCR法是能夠滿足不斷增長的食品安全檢測需求的快捷方法。通過把DNA目標分子引物和探針結合在一起的特殊方法，使得實時定量PCR技術有著很高的靈敏度。
Biotecon公司foodproof系列產品已經有15年歷史了，已成為食品領域中用來實時定量檢測食源性病原體的重要產品，為食品實驗室提供了自動化檢測的可能性。該公司的常規檢驗方法和自動化樣本制備設備都在合作伙伴BAV衛生和質量保證研究所經過了長期的測試檢驗。
BAV衛生和質量保證研究所是德國最大的、最現代化的食品微生物檢測實驗室，在德國約有1000多家企業客戶。除了對食品進行檢驗、測試外，也對藥品、化妝品生產領域中的樣本進行檢驗。其中，重要病原體中最常被檢驗的就是沙門氏桿菌種。這種革蘭氏陰性的沙門氏桿菌屬于腸桿菌科的病原體，會導致人類患上沙門氏菌病(德國最常見的食源性疾病)。
接下來介紹在foodproof Roboprep+ HT150-8機器人的幫助下，使用foodproof Salmonella試劑盒結合foodproof磁珠法進行沙門氏菌的常規檢測。
早在2013年時，病原體檢測的實時定量PCR技術就通過Microval獲得了ISO16140標準和AOAC-RI認證。
圖2.BAV公司利用自動化DNA提取設備和實時定量聚合酶鏈式反應技術檢測沙門氏菌的食品類型百分比。
使用的材料和方法
2012年7月至2014年5月期間，BAV研究所對28490份樣本進行了沙門氏菌病原體的檢測。除了肉、腸類樣品外，也包括沙拉，甜點，冰淇淋，熟食和魚類產品的樣本(見圖1)。
樣本富集和DNA提取
樣本富集時將25g被測樣本原料與225ml的緩沖蛋白胨水混合在一起，在37℃的恒溫器中培育19~20h;然后抽取8ml懸浮液注入離心管中。為滿足大批量樣本制備的需求，BAV公司實驗室采用了自動化DNA提取設備：foodproof RoboPrep+HT 150-8型機器人和foodproof磁珠法沙門氏菌試劑盒。
沙門氏菌的檢驗
使用foodproof沙門氏菌試劑盒、雜交探針和Roche LightCycler 480實時熒光定量PCR儀檢測病原體。整套裝備中含有放大控制器，以便保證陰性PRC檢測結果的正確性。如圖1所示的檢測流程，從樣本富集開始到得出檢測結果為止，時間可縮短到24h以內，陽性樣本結果最后還要通過傳統方法再次核實。要知道，如果使用ISO 6579標準中的參考方法，進行沙門氏菌檢測的話，至少需要三天，陽性樣本則至少四天。
結果
在這28490份食品樣本中，有237份樣本沒有得出明確的檢測結果，需要使用傳統方法再次檢驗。這就意味著有99.17%的樣本可以用分子生物學方法進行檢驗;有159份樣本檢驗結果呈陽性，隨后按照ISO 6579標準中規定的傳統方法對這些樣本進行了核查，大部分樣本(n=97)的核實結果與分子生物學的PCR陽性結果相符;只有62份樣本無法證實為PCR陽性的檢驗結果，相當于樣本總量的0.21%(參見表1)。利用foodproof沙門氏菌試劑盒檢測結果的放大曲線參見圖3。
表1.利用foodproof沙門氏菌試劑盒對不同食品樣本進行檢測的結果
|
月份 |
百分比 |
可疑的實時定量聚合酶鏈式檢驗結果（未用傳統方法核實） |
|
|
數量 |
單位 % |
||
|
07/2012 |
1301 |
2 |
0,15 |
|
08/2012 |
1119 |
5 |
0,45 |
|
09/2012 |
1036 |
6 |
0,58 |
|
10/2012 |
1151 |
2 |
0,17 |
|
11/2012 |
1033 |
1 |
0,10 |
|
12/2012 |
706 |
1 |
0,14 |
|
01/2013 |
1069 |
3 |
0,28 |
|
02/2013 |
1176 |
3 |
0,26 |
|
03/2013 |
1530 |
1 |
0,07 |
|
04/2013 |
1319 |
0 |
0,00 |
|
05/2013 |
1152 |
1 |
0,09 |
|
06/2013 |
1255 |
0 |
0,00 |
|
07/2013 |
1304 |
1 |
0,08 |
|
08/2013 |
1495 |
7 |
0,47 |
|
09/2013 |
1196 |
3 |
0,25 |
|
10/2013 |
1022 |
4 |
0,39 |
|
11/2013 |
1401 |
0 |
0,0 |
|
12/2013 |
980 |
2 |
0,20 |
|
01/2014 |
1228 |
1 |
0,08 |
|
02/2014 |
1462 |
5 |
0,34 |
|
03/2014 |
1638 |
4 |
0,24 |
|
04/2014 |
1471 |
5 |
0,34 |
|
05/2014 |
1445 |
5 |
0,35 |
|
Total |
28.490 |
62 |
?0.21 |
圖3.發現沙門氏菌的放大曲線(上)和內部監控情況(下)。
討論
foodproof沙門氏菌試劑盒是食品檢測中非常可靠的快檢方法。美國能力驗證研究所發表了一份關于在微生物食品檢測實驗室間假陽性結果數量研究的比對測試。報告中采集的是1999年到2012年間的數據。研究表明：此間只有4.9%的沙門氏菌檢測樣本被評定為假陽性結果。從2012年7月到2014年5月，BAV公司檢測數據表明：只有0.21%的樣本結果與使用傳統方法的結果不同，只有≤2%的樣本無法檢驗。Microval和AOAC的驗證數據也表明：foodproof沙門氏菌試劑盒檢測結果正確性約98%。
這都說明實時定量聚合酶鏈式反應技術在食品領域中的檢測結果是可靠的。