PBMC 單核細胞的密度梯度離心分離
血液主要由血清和血細胞組成,主要包括紅細胞,白細胞和血小板等。白細胞還可以細分為淋巴細胞和單核細胞等。由于這些細胞具有簡單的細胞核,統稱為外周血單核細胞 (PBMC)。
PBMC 單核細胞可通過 Ficoll 密度梯度離心的方法,從血液中進行分離。
在 Ficoll 密度梯度離心的過程中,需要注意的有:
● 使 Ficoll-Paque Plus 和 PBS 升至室溫,并用 70% 乙醇消毒血袋外部,良好的溫度 (18-20℃) 控制有利于穩定 Ficoll 的密度,可以實現更好的分離效果
● 血液與 PBS 的比例保持 1:1,擰緊蓋后顛倒混合幾次
● 可以使用 ep 25 mL 錐底管,并輕輕的將血液/PBS 混合物鋪置 Ficoll 上
● 離心參數:400 x g, 20 ℃,加減檔 0/0,防止離心結束后的剎車震動,降低重懸,更利于良好分層。隨后開啟“Atset”功能,可以在達到指定轉速后開始計時,離心 30 分鐘
● 使用 PBS 洗滌細胞,離心除去殘余的 Ficoll 液,400 x g, 20 ℃,10 分鐘,重復幾次