用流式細胞術計數網織血小板

EDTA 甲醛 Tyrode 緩沖液 噻唑橙染液

流式細胞儀

1. 制備富含血小板血漿：將 EDTA 抗凝全血 500 r/min 離心 8 min，取出上層含血小板血漿，2000 r/min 離心10 min，棄上清液，底層血小板用檸檬酸鈉葡萄糖 EDTA 緩沖液（pH 7.4）再懸浮，并洗 1 次，再用 Tyrode 緩沖液（含牛血清白蛋白和 EDTA）洗 2 次，再懸浮在 Tyrode 緩沖液中，調整血小板濃度為 100 x 10⁹ /L 作為樣品。

2. 醛化固定：向標本加入 1% 甲醛，在 4℃ 放置 2 h 以上，以固定血小板。檢測前用 Tyrode 緩沖液洗一次。

3. 染色計數：向 50 ul 經過醛化固定的血小板懸液加 450 ul 噻唑橙染液，放置室溫暗處 1~2 h，用流式細胞儀測定 525 nm 波長處的熒光強度，代表 RP 數量。同時計數血小板總數，計算得知 RP 的比值。這即 RP 的半自動計數法。因為該法采用噻唑橙染色，
被染色的血小板又稱為噻唑橙陽性血小板（TO⁺ 血小板）。