實驗方法原理 本方案是 Kupiec 等所述方法（1987) 的改良版本，包括用蛋白酶 K 消化細胞和組織，用高濃度甲酰胺分離 DNA-蛋白質復合物（染色質用火棉膠袋充分透析去除蛋白酶和有機溶劑等過程。甲酰胺是一種離子化溶劑，能分離蛋白質-DNA 復合物并使蛋白變性和釋放，但他并不明顯影響蛋白酶 K 的活性。用本程序制備的基因組 DNA 很大 7200 kb，適于用高包裝容量載體構建文庫及通過脈沖凝膠電泳分析大片段 DNA。本方法有兩個缺點：比其他方法需要更多的時間；所制備 DNA 的最終濃度頗低（約 10 μg/ml )。從 1X108 培養的非整倍體哺乳類細胞（如 HeLa 細胞）中大約可制備 1 mg 高分子質量 DNA。
實驗材料 λ 噬菌體的線性單體和多聯體哺乳類細胞新鮮組織血樣
試劑、試劑盒 透析緩沖液甲酰胺變性緩沖液TE
儀器、耗材 脈沖電場凝膠或 0.6% 瓊脂糖凝膠帶有不銹鋼杯的攪拌器火棉膠袋尖頭去除的黃色尖頭透析管夾玻璃棒水浴或孵箱
實驗步驟
一、材料
1. 緩沖液和溶液
透析緩沖液 1（20 mmol/L Tris-Cl (pH 8.0)，0.1 moI/L NaCl，10 mmol/L EDTA ( pH 8.0)，制備 6 L 透析緩沖液 1，儲于 4℃。）
透析緩沖液 2（10 mmol/L Tris-Cl (pH 8.0)，10 mmol/L NaCl，0.5 mmol/L EDTA ( pH 8.0)，制備 6 L 透析緩沖液 2，儲于 4℃。）
甲酰胺變性緩沖液（20 mmol/L Tris-Cl ( pH 8.0)，0.8 mol/L NaCI，80% (V/V) 甲酰胺）
TE ( pH 8.0)
2. 凝膠
脈沖電場凝膠或 0.6% 瓊脂糖凝膠
3. 核酸和寡核苷酸
λ 噬菌體的線性單體和多聯體
4. 專用設備
帶有不銹鋼杯的攪拌器（用于組織）
火棉膠袋
尖頭去除的黃色尖頭
透析管夾
玻璃棒
預置于 15℃ 的水浴或孵箱
預罝于 50℃ 的水浴
5. 細胞和組織
單層或懸浮培養的哺乳類細胞，或新鮮組織，或血樣
二、方法
1. 采用方案 1 步驟 1~4 制備細胞懸液（或冰凍細胞粉末）的裂解液。
2. 將含有裂解細胞和裂解緩沖液的溶液冷卻至 15℃。每 1 ml 細胞裂解液加 1.25 ml 甲酰胺變性緩沖液，用玻璃棒溫和地混勻溶液。將溶液在 15℃ 放置 12 h。
3. 將黏滯的溶液灌入一個或者多個火棉膠袋中。透析袋開口用透析管夾封住，在 4℃ 于 2 L 裂解緩沖液 1 中透析 45 min。換新鮮緩沖液 1 并繼續透析至少 4 h 后，再換 2 L 新鮮透析緩沖液 1 透析另外 4 h。將 DNA 在 2 L 新鮮透析緩沖液 2 中透析 3 次，每次至少 4 h。
4. 測定 DNA 的濃度。
5. 脈沖凝膠電泳或者常規的 0.6% 瓊脂糖凝膠電泳。用 λDNA 單體或者線性多聯體作為分子質量標記。基因組 DNA 大小將超過 200 kb。
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