(1) 將單層細胞 (2X 106/ml, 6 ml)培養在直徑 60 mm 的平皿上，生長液為含 10% 小牛血清、89%水解乳蛋白一酵母浸液培養液，加雙抗并調 pH 至 7.2 。
(2) 培養物置于潮濕 5% CO2 培養箱中，于37℃培養成單層，除去生長液用 Hanks 液洗一次。
(3) 每皿加入各稀釋度病毒液 0. 1 ml 或 0. 2 ml, 輕輕搖勻，使之均勻分布于整個細胞層， 37℃ 5% CO2 培養箱中吸附 90min 后，加營養瓊脂覆蓋。
(4) 將雙倍濃度營養覆蓋層溶液與等量的 1%(已融化)的瓊脂水液混合，維持在 45-50℃,每皿加入 8ml 。雙倍營養覆蓋層溶液配制： 6 ml 滅活小牛血清、 20 ml 10倍濃 Eagle (MEM)，4 ml 3%谷氨酰胺(水配)、 5 ml 8. 8%NaHC03 (水配)、 2 ml 雙抗、 63 ml 無菌三蒸水、加入等量 56℃ 巳融化的 2%瓊脂的水溶液并搖勻。
(5) 冷凝后翻轉平皿，37℃5% CO2 培養箱培養 4~5 d 后再加入 1 ml 營養覆蓋層。
(6) 繼續培養，在第 5-8 d(依病毒而定)，加入 0.01% 過濾中性紅，檢查空斑形成情況。 展開 | 