(1) 用細胞培養板 (6孔)，若用舊板，洗凈后浸于 95% 酒精中5 min, 再用紫外線照射 2-4 h備用，新板可直接使用。
(2) 將傳代細胞系經胰酶消化分散后，用含 5%小牛血清的 Eagle 將細胞配成 3 X 105/ml(依細胞種類而定)。
(3) 按每孔 3ml 加入細胞懸液，在 37℃ 5% CO2 培養箱中培養 24 h 或 48 h, 直至形成單層。
(4) 除去生長液，每孔加入 0.1 ml 不同稀釋度病毒，然后將此板于 37℃5% CO2培養箱中吸附1 h 。
(5) 將雙倍營養覆蓋液與等量融化的 2% 瓊脂水溶液混勻，并維持于 45-50℃防凝。雙倍營養覆蓋溶液配制： 4 ml 滅活胎牛血清， 20 ml 10倍濃縮 Eagle, 13. 3 ml 1%酵母浸液－5% 水解蛋白水溶液， 6 ml 7. 5% NaHC03( 水配）， 2 ml 雙抗（水配）， 54. 7 ml 無菌三蒸水，加入等量 56℃已融化的 2%瓊脂水溶液并搖勻。
(6) 融化的營養瓊脂覆蓋層液在 45-50℃下每孔加 3ml, 待冷凝后倒置于 37℃5% CO2 培養箱內培養。 1~5 d 后再加第二層染色覆蓋層（依病毒種類而定），其中含有 1 : 25 000 的中性紅，繼續培養于暗處，定期檢查空斑情況。 展開 | 