用Bradford方法測定蛋白質含量實驗

材料

十二烷基硫酸鈉（SLS,SDS)，水溶 3.5 mmol/L 或 0.3mol/L NaOH。考馬斯亮藍 G-250, 0.12 mmol/L(0.01%)，溶于 4.7 % 乙醇和 85 % (W/V ) 磷酸：將 100 mg 考馬斯藍溶于 50 ml 95% 乙醇，加人 100 ml 85% 磷酸；然后以 1L 水稀釋。

蛋白質標準溶液（如 BSAlOpg/ml)；設計實驗，然后間隔 1～2 個月，以 BSA 或相似的標準蛋白質（1 50ug/ml) 制作標準曲線。

操作步驟

1. 將蛋內質（1～20ug）或細胞（約 1X10⁶) 溶于 100ul3.5 mmol/L SLS 或 0.3mol/L NaOH 中。

2. 分別加人 100ul 試劑空白對照（SLS)，100ul 受測蛋白質溶液，lOOul BSA 標準品，每個 3 管。

3. 加人 lml 考馬斯藍。混勻溶液，靜置 10 min。

4. 在分光光度計 595nm 處，以試劑空白作對照，閱讀受測管如 BSA 標準數字。

提示 Bradford 法的試劑可以從 Bio - Rad 購得試劑盒。試劑盒中的磺基羅丹明（Sulforhodamine B) [Skehanetal， 1990 ] 和試劑 N -二（羥乙基）甘氨酸 (BCA ) [Smith et al.， 1 9 8 5 ] 都可用于測定蛋白質的含量并且對微量滴定實驗敏感度很高。Micro -BCA 試劑盒可從 Piece (見附錄 ID ) 得到。這些試劑很靈敏，適用于少量細胞（約 1X10³) 的檢測。