方案11.8 用10× 濃縮液配制培養基（用于密封的培養瓶）
方案11.8 用10× 濃縮液配制培養基（用于開式容器于二氧化碳溫箱中培養）
方案11.8 用10× 濃縮液配制培養基（用于開放式容器于二氧化碳溫箱中培養）
| 實驗方法原理 | 配制全成分培養基時，準備好幾個盛有無菌去離子蒸餾水的容器，一個容器的容量至少要夠用1~3 周。加濃縮培養基和其他成分，調整pH , 直接使用或放回冰箱。 用于密封的培養瓶，含空氣、低濃度 HCO3— 、大氣 CO2 濃度和低緩沖力。 |
|---|---|
| 實驗材料 | UPW 培養基10×濃縮液 谷氨酰胺 牛血清 抗生素 青霉素 鏈霉素 HEPES |
| 試劑、試劑盒 | NaOH |
| 實驗步驟 | 1. 將血清和谷氨酰胺解凍，置于超凈工作臺內。 2. 所有曾放入水浴鍋的瓶子都要擦干凈后再放入超凈臺。 3. 加人上述“無菌溶液”所列成分，加 HEPES 可能會增加緩沖能力，對于某些細胞系，在高細胞密度情況下如果產生很多酸性物質，培養瓶可使其排出。 4. 加人 1 mol/L NaOH ，使 pH 達到 7.2 （20°C ) , 孵育之后培養基的 pH 將上升至 7.4 (37°C )，但如果是第 1 次使用的配方，這個數值可能還需要通過滴定試驗來檢驗。 |
| 注意事項 | 如果需要加人其他成分，而這些成分是用水配制的，，則加入前應先從已準備好的水中取出相同體積的水；如果這些成分溶解在等滲鹽溶液中，則只要加入至終體積。因為血清是等滲的，所以血清也是加人至終體積，盡管這樣做會稀釋培養基的營養成分。 在37°C 時要不斷地平衡和檢測pH , 隨著溫度的升高，CO2 的溶解度會降低，HEPES 的 pKa 也會發生變化。 |
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